[发明专利]奶牛瘤胃菌群的体外培养及保存方法

说明书

本发明公开了奶牛瘤胃菌群的体外培养方法，利用双外流连续培养系统进行奶牛瘤胃菌群的体外培养，将新鲜的奶牛瘤胃液接种至已预热并经CO₂饱和的发酵罐中；开启搅拌和CO₂通气装置，以瘤胃液供体牛的TMR日粮作为发酵底物，投料量为36‑80g/天，并向系统中输入缓冲液，38.5‑40℃发酵培养4‑10d，收集流出的固相和液相消化糜振荡混匀，纱布过滤，获得含瘤胃菌群的培养物。本发明还提供奶牛瘤胃菌群的体外保存方法，向奶牛瘤胃液或其体外培养物中加入脱脂乳粉后冻干。本发明解决了奶牛瘤胃微生物的体外扩大培养和保存问题，便于瘤胃移植的实施，瘤胃液无需通过瘘管牛现用现取，增加了安全性，有利于瘤胃液移植的推广应用。

技术领域

本发明涉及微生物培养及保存技术，具体地说，涉及奶牛瘤胃菌群的体外培养及保存方法。

背景技术

消化代谢类疾病、乳房疾病(包括乳房炎、乳头损伤、乳区坏死等)和蹄病是造成奶牛淘汰率偏高的主要原因。目前，这些疾病的治疗主要依靠依靠抗生素。抗生素的应用在奶牛疾病控制中起了重要作用，但随着抗生素的长期大量使用，其负面效应也日益显露出来，如引起病原微生物产生抗药性、破坏动物体内正常菌群的生态平衡、降低动物机体免疫功能以及药物残留对人类及环境造成的危害等。在奶牛养殖场中，抗生素治疗失败的案例屡见不鲜，是导致奶牛淘汰和经济损失的重要原因。在原奶中的抗生素残留是乳业中难以避免的顽疾，尤其是以含有抗生素残留的原奶所加工生产的婴幼儿奶制品，带来的危害更是无法预计。抗生素对婴幼儿的神经系统造成不可逆的损伤，极易导致婴幼儿失聪与失声。因此对于奶牛养殖业来说，提高饲养管理水平，寻求新的可替代抗生素的治疗方法迫在眉睫。

近些年，对于肠道菌群的重要性认知达到了前所未有的新高度。伴随着众多疾病的肠道菌群研究中表现出来的菌群差异，以及改变肠道菌群结构之后导致了许多疾病的发生，表明肠道菌群与人体疾病发生有着重要的联系。肠道菌群与人体的关系除了在营养消化方面的辅助，同时己经渗透到人体系统性全身疾病免疫防治中。伴随着人类肠道微生物和粪便菌群移植(Fecal microbiota transplantation)研究和应用的发展，瘤胃移植(Rumen transfaunation)也逐渐受到关注。瘤胃移植是指将供体瘤胃液(包括瘤胃菌群和代谢产物)作为整体移植到受体瘤胃内的技术手段。瘤胃菌群移植已被用于简单消化不良的临床治疗。研究发现，瘤胃移植对提高围产期奶牛采食量和产奶量具有积极作用，并对低乳脂症、酮病和真胃移位等代谢疾病的预防和治疗有很好的促进效果。然而，在实际生产中，该方法却很少被使用。目前，瘤胃移植的实施主要通过制作瘘管牛或通过瘤胃插管法，瘘管手术维护成本高；瘤胃插管费时费力，当采集的瘤胃液量过大时，供体牛的健康会受影响，应用受到限制。此外，瘤胃菌群离体后，其环境发生变化，如无氧环境变成有氧环境，微生物代谢底物得不到补充，大部分微生物的失去活性甚至死亡，运送过程导致菌群结构发生改变。采集的瘤胃液，必须在尽可能短的时间内迅速移植，取用极不方便。

发明内容

本发明的目的是提供奶牛瘤胃菌群的体外培养及保存方法。

为了实现本发明目的，本发明提供的奶牛瘤胃菌群的体外培养方法，利用双外流连续培养系统进行奶牛瘤胃菌群的体外培养，具体方法为：将新鲜的奶牛瘤胃液作为接种物接种至已预热并经CO₂饱和的发酵罐中；开启搅拌和CO₂通气装置，使整个系统处于厌氧环境，以瘤胃液供体牛的TMR日粮作为发酵底物，并向双外流连续培养系统中输入缓冲液，38.5-40℃发酵培养4-10d，收集流出的固相和液相消化糜振荡混匀，纱布过滤，获得含瘤胃菌群的培养物。