[发明专利]一种收集纯净菌丝的方法

说明书

本发明提供一种收集纯净菌丝的方法，包括以下步骤：制备培养基：准备一用于培养菌丝的玻璃皿，将玻璃纸裁剪成小于玻璃皿的大小；在超净工作台上将制备好的培养基倒于无菌的培养皿中，待培养基冷却之后，将无菌的玻璃纸放在培养基上表面，将菌株接入含有培养基的培养皿中，培养皿封口后置于适宜菌株生长的条件下培养，菌丝可以穿过玻璃纸孔隙进行生长直至菌丝长满培养皿；在超净工作台上使用冷却无菌的载玻片进行收集菌株；该方法使用已灭的载玻片进行收集。使用玻璃纸贴在培养基中，玻璃纸将菌丝与培养基分开，但不影响菌丝生长，菌丝可以穿过玻璃纸孔隙进行生长，最后使用载玻片进行收集菌丝，可以快速收集纯净菌丝。结果表明该方法不仅省时高效，而且极大提高收集样本菌丝的质量。

技术领域

本发明涉及一种收集纯净菌丝的方法。

背景技术

菌丝收集是微生物领域实验过程中必不可少的环节，目前使用牙签、枪头等进行收集的菌丝，不但耗时费力，而且容易携带少量培养基，一定程度的影响了后期样本的提取和实验分析。针对目前菌丝收集中的问题，本实验研究一种可以收集快速收集纯净菌丝的方法。以马铃薯晚疫病菌和马铃薯早疫病菌两种病原菌为例。

发明内容

本发明对上述问题进行了改进，即本发明要解决的技术问题是现有的菌丝收集效率低容易混杂培养基而影响检测。

本发明的具体实施方案是：1、一种收集纯净菌丝的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）、制备培养基：分装至无菌的瓶子内，进行高压灭菌；

（2）、准备一用于培养菌丝的玻璃皿，将玻璃纸裁剪成小于玻璃皿的大小，并放置玻璃皿中包装后一起进行高压灭菌，玻璃纸灭完菌后再放置烘箱烘干；

（3）、在超净工作台上将制备好的培养基倒于无菌的培养皿中，待培养基冷却之后，将无菌的玻璃纸放在培养基上表面，将菌株接入含有培养基的培养皿中，培养皿封口后置于适宜菌株生长的条件下培养，菌丝可以穿过玻璃纸孔隙进行生长直至菌丝长满培养皿；

（4）、将载玻片洗净，放置烘箱烘干，烘干后将载玻片分装于玻璃皿中，将带有载玻片的玻璃皿包装好后进行高压灭菌，灭完菌后再放置烘箱烘干；

（5）、在超净工作台上使用冷却无菌的载玻片进行收集菌株，然后借助无菌牙签将收集好的菌丝放入无菌的2mL的离心管中并标记上菌株编号；

（6）、使用后的载玻片洗净后又可以重复使用。

2、根据权利要求1所述的一种收集纯净菌丝的方法，其特征在于，所述步骤（4）中烘干箱的烘干温度为65℃。

3、根据权利要求1所述的一种收集纯净菌丝的方法，其特征在于，所述步骤（3）及步骤（5）中超净工作台采用紫外照射30min以上。

4、根据权利要求1所述的一种收集纯净菌丝的方法，其特征在于，所述菌丝为马铃薯晚疫病菌纯净菌丝时，其培养基为黑麦培养基：黑麦培养基具体制造方法如下，使用电子天平称取50g 黑麦，放置2L的烧杯中进行洗净，浸泡8h，然后使用豆浆机进行三次研磨，每次1min，之后放置于65℃的水浴锅中水浴2h，水浴结束之后使用4层纱布进行过滤，称取15g琼脂加入，并用纯净水定容至1L，加热溶解，分装至瓶子，进行高压灭菌。

5、根据权利要求1所述的一种收集纯净菌丝的方法，其特征在于，所述菌丝为马铃薯早疫病菌纯净菌丝时，其培养基为PDA培养基，所述PDA培养基制备方法包括：使用电子天平称取200g去皮马铃薯，将马铃薯切块放入锅中并加入少量纯净水加热，然后将土豆泥用纱布过滤，称取18g琼脂粉，20g葡萄糖，并用纯净水定容至1L，加热溶解，加热的同时搅拌，分装至瓶子，进行高压灭菌。