[发明专利]一种靶向MUC16的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向MUC16的单链抗体，所述靶向MUC16的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本发明还提供了一种包括所述靶向MUC16的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞，所述靶向MUC16的嵌合抗原受体可以专一性的靶向MUC16，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，更好的维持细胞的活力和杀伤力。本发明还提供了一种靶向MUC16的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向MUC16的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

卵巢癌是世界上致死率最高的妇科恶性肿瘤，由于没有明显的症状，以及缺乏科学可信的检测手段，大部分患者在确诊时已是癌症晚期。因此，卵巢癌的治愈率普遍较低。MUC16是一种跨膜蛋白，是粘蛋白(mucin，MUC)家族的成员之一。MUC16在宫颈癌、胰腺癌、卵巢癌组织中的表达量均增加，是卵巢癌重要标记物，可以用以卵巢癌早期诊断、检测治疗效果以及评价肿瘤是否复发。研究表明，MUC16可以通过与肿瘤坏死因子相关的调节死亡诱导配体相互作用，抑制细胞凋亡，MUC16的高表达还可以诱导肿瘤细胞侵袭能力增强。

免疫细胞治疗是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，其中嵌合抗原受体T细胞技术(CAR-T)为当前过继性细胞回输治疗技术最新的免疫细胞技术之一，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到清除恶性肿瘤细胞的目的而受到广泛的关注和研究。因此，结合CAR-T手段，靶向和结合MUC16靶点，作为新的肿瘤治疗药物，对肿瘤的治愈有重大意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向MUC16的单链抗体，以及包括所述靶向MUC16的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞。所述靶向MUC16的嵌合抗原受体可以专一性的靶向MUC16，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞。本发明还提供了一种靶向MUC16的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种靶向MUC16的单链抗体，所述靶向MUC16的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

可选的，所述靶向MUC16的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可选的，所述靶向MUC16的单链抗体的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQ ID NO:2具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQ ID NO:1。

本发明第一方面提供的所述靶向MUC16的单链抗体能够与MUC16蛋白发生特异性结合，对表达MUC16的肿瘤细胞，特别是实体瘤细胞具有较强的亲和活性。

第二方面，本发明提供了一种靶向MUC16的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向MUC16的嵌合抗原受体CAR-MUC16，所述CAR-MUC16的氨基酸序列包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向MUC16的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中，所述靶向MUC16的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向MUC16的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。

在本发明中所述胞外铰链区用于促进所述靶向MUC16的单链抗体与肿瘤上的MUC16结合。