[发明专利]一种CST1磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种CST1磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒及检测方法，属于免疫诊断领域，试剂盒包括链霉亲和素偶联磁珠、生物素标记的捕获抗体、吖啶酯标记的检测抗体、预激发液和激发液以及洗涤浓缩液；本发明检测试剂盒利用磁分离以及吖啶酯直接化学发光检测法的优势，使检测过程简单、易于操作、便于自动化；同时本发明使用的单抗作为捕获抗体和检测抗体，使得试剂盒还具有灵敏度高、特异性好、检测限低及稳定性好等特性，线性范围达到6.25～1600U/mL，最低检测限可达1.5U/mL，能够用于检测CST1蛋白过量表达或诊断以CST1蛋白异常表达为表征的疾病的产品的应用。

技术领域

本发明属于免疫诊断领域，涉及一种CST1磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，还涉及利用该试剂盒的检测方法。

背景技术

半胱氨酸蛋白酶抑制剂SN(CST1)是人类半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员，由CST1基因编码的含141个氨基酸的蛋白质，分子量为16.4Kda。CST1分子中含有两个二硫键，为典型的分泌蛋白，分布于体液和分泌物中，如眼泪、唾液、血清、血浆等。

随着对肿瘤发病机理研究的不断深入，发现CST1作为组织蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶的内源性抑制剂家族成员之一，在肿瘤的发生、发展、浸润和转移过程中起着非常重要的作用。

研究结果显示，半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员在不同肿瘤中的表达水平有所上升，例如Cystatin C在卵巢癌和头颈部癌症中的表达有不同水平的上升，Cystatin A在非小细胞肺癌中的表达水平有所增加。据报道CST1能够用于食管癌、肺癌、乳腺癌中均有异常表达。CST1 的定量检测具有重要的临床意义。目前样本中CST1的检测方法主要为酶联免疫法，酶联免疫法存在着操作繁琐、检测时间长、自动化程度低、受人为因素影响较大等诸多弊端；且现有 CST1检测体系中多采用多克隆抗体；抗体特异性差，不能区分CST1高度同源家族蛋白，由于其抗体本身效价或特异性的原因，也使得其对CST1检测的临床效用受到局限，降低了样本检测的特异性，同时也对灵敏度产生一定的影响。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种CST1磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒；本发明的目的之二在于提供所述的CST1磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒的检测方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种CST1磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，包括链霉亲和素偶联磁珠、生物素标记的捕获抗体、吖啶酯标记的检测抗体、预激发液和激发液以及洗涤浓缩液；所述捕获抗体为杂交瘤细胞株4G2分泌的单克隆抗体，所述检测抗体为杂交瘤细胞株4E7分泌的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株4G2保藏号为CGMCC No.15199，杂交瘤细胞株4E7保藏号为CGMCC NO.15198。

优选的，所述预激发液为质量分数为0.1-1％的过氧化氢；所述激发液为0.05-1mol/L的氢氧化钠溶液。

优选的，所述洗涤浓缩液为含有吐温20的磷酸盐缓冲液；所述吐温20的体积分数为 0.5-3％，所述洗涤浓缩液的pH为7.0-7.8。

优选的，还包括校准品，所述校准品为CST1蛋白溶液。

优选的，所述磁珠的粒径为0.3-2μm，磁珠用量为30-100μl。

优选的，所述生物素标记的捕获抗体的终浓度为0.1-2μg/ml。

优选的，所述吖啶酯标记的检测抗体的终浓度为0.1-6μg/ml。

2、利用所述的CST1磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

(1)取生物素标记的捕获抗体、待检测样本、吖啶酯标记的检测抗体于反应杯中，充分混匀，并于37℃孵育15min，同时准备校准品；