[发明专利]一种免疫球蛋白制剂的纯化方法

权利要求书

1.一种免疫球蛋白制剂的纯化方法，将待处理的蛋白用层析法处理，其特征在于所述的层析为免疫亲和层析，所涉及的免疫球蛋白是马免疫球蛋白F(ab’)₂，所用的层析介质为破伤风类毒素与载体(Matrix)偶联；所用的载体为预活化的琼脂糖凝胶；

所述的方法包括：

先清洗载体去除保护剂，再将载体与配基缓冲体系均置换为pH 8.3的0.1M NaHCO₃含0.5M NaCl溶液，然后将载体与配基混合在室温下振荡1～4小时或4℃条件下过夜后装柱，使用pH 8.3的0.1M NaHCO₃含0.5M NaCl溶液冲洗层析柱去除未结合配基，再分别依次用pH8.0的0.1M Tris-HCl缓冲液、pH 8.0～9.0的0.1M Tris-HCl含0.5M NaCl缓冲液和pH 3.0～4.0的0.1M HAc含0.5M NaCl缓冲液冲洗层析柱，再将破伤风马免疫血浆经胃酶消化、硫酸铵沉淀、超滤处理后加载到层析柱中，用平衡缓冲液冲洗层析柱至紫外吸收值达到基线，再用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，得到马破伤风免疫球蛋白F(ab’)₂溶液，用30～50KD的超滤膜超滤置换缓冲体系至超滤浓缩液蛋白含量为10～40g/L，所述平衡缓冲液为20～50mM PB，含0.1～0.5M NaCl，pH 7.0±0.2；所述洗脱缓冲液为0.1～0.5M HAc溶液、0.1～0.5M HAc含0.1～0.5M NaCl溶液、0.05～0.5M Gly-HCl溶液或0.05～0.5M Gly-HCl含0.1～0.5M NaCl溶液中的一种；所述超滤缓冲液为0.4％～0.7％NaCl溶液。

2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白制剂的纯化方法，其特征在于

将权利要求1得到的洗脱液调整pH至6.0～7.0，再按9.0～11.0g/L加入甘氨酸，用稀释液稀释至效价≥2000IU/ml，除菌过滤，分装，得到一种高效价、高比活性的马破伤风免疫球蛋白F(ab’)₂制剂，所述稀释液为0.9％～1.1％甘氨酸溶液，含0.4％～0.7％NaCl。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所用的载体为NHS-activated Sepharose4Fast Flow、CNBr-activated Sepharose 4B、Epoxy-activated Sepharose 6B、CNBr-activated Sepharose 4Fast Flow、CNBr-activated Sepharose 6MB、CNBr-activatedBestarose 4Fast Flow、CNBr-activated Bestarose 4B、NHS-activated Bestarose4Fast Flow或Epoxy-activated Bestarose 6B中的任一种。