[发明专利]Ogura CMS不育恢复基因RfoB

说明书

本发明涉及基因工程领域领域，具体涉及恢复基因Rfo^B、其表达载体及其应用。Rfo^B是以甘蓝Ogura CMS细胞质不育系为对象，根据恢复基因Rfo序列，结合甘蓝基因密码子偏好性，人工合成新的Rfo^B序列；将PRfo启动子，Rfo^B基因以及终止子E9‑T融合获得Rfo^B基因表达盒。构建其植物表达载体后利用农杆菌介导法直接转化甘蓝Ogura CMS细胞质不育系，获得甘蓝转基因植株，其育性恢复，转基因植株自交正常结籽，其作为父本导入其他甘蓝类Ogura CMS细胞质不育系后，携带Rfo^B基因的个体均能恢复育性。

技术领域

本发明涉及基因工程领域领域，具体涉及人工合成的Ogura CMS细胞质雄性不育恢复基因Rfo^B、Rfo^B植物表达载体及其在Ogura CMS细胞质雄性不育恢复系创建中的应用。

背景技术

目前，在芸苔属植物中被广泛使用的Ogura CMS细胞质雄性不育于1968年在日本鹿儿岛的萝卜中发现(Ogura H.Studies on the new male-sterility in Japaneseradish,with special reference to the utilization of this sterility towardsthe practical raising of hybrid seeds.Mem Fac Agric Kagoshima Univ,1968，6：39–78)，不育性状主要由线粒体上的orf138基因所控制(Bonhomme S,Budar F,Lancelin D,Small I,Defrance MC,and Pelletier G.Sequence and transcript analysis of theNco2.5-specific fragment correlated with cytoplasmic male sterility inBrassica cybrids.Mol Gen Genet，1992，235:340–348)。orf138基因表达产物具有细胞毒性，通过影响花药绒毡层细胞线粒体活性而导致不育。后来，通过远缘杂交、胞质非对称融合等手段，将其线粒体先后转移到油菜、甘蓝类蔬菜等植物中，获得稳定的细胞质雄性不育系，并广泛应用于杂种一代的品种选育(Pelletier G，Primard C，Vedel F，Chetrit,RemyR,Rousselle,Renard M.Intergeneric cytoplasmic hybridization in Cruciferae byprotoplast fusion.Mol Genet Genomics，1983，191(2):244-250；方智远，刘玉梅，杨丽梅，王晓武，庄木，张扬勇，孙培田.甘蓝显性核基因雄性不育与胞质雄性不育系的选育及制种.中国农业科学，中国农业科学2004,37(5):717-723)。

甘蓝类蔬菜包括结球甘蓝、花椰菜、青花菜、抱子甘蓝、芥蓝、羽衣甘蓝、球茎甘蓝等不同变种，随着Ogura CMS细胞质雄性不育导入不同甘蓝类蔬菜，越来越多的甘蓝类蔬菜采用Ogura CMS细胞质雄性不育选育杂种一代(张艳王小佳李成琼宋洪元任雪松司军.甘蓝细胞质雄性不育材料分子鉴定及花器官形态对核背景的响应.园艺学报，2010，6：915-922)。由于Ogura CMS细胞质雄性不育基因位于细胞质内，所有可育材料与其杂交后得到的后代均为100％不育，因此，位于不育材料(品种)中的优异性状无法被分离出来与其他优异性状进行组合而被再利用，其实质是对优异种质资源的再利用形成了技术封锁，对甘蓝类蔬菜优异育种材料的创新具有明显的阻碍作用。因此，有必要针对Ogura CMS细胞质雄性不育系选育专门的恢复系。然而，到目前为止，仍没有针对Ogura CMS细胞质雄性不育的甘蓝类蔬菜恢复系被报道。