[发明专利]一种稻米中镉结合蛋白的提取分离方法

说明书

本发明公开一种稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，包括以下步骤：对镉污染稻米进行脱脂处理，得到脱脂稻米粉；使用去离子水对脱脂稻米粉进行搅拌提取，获得清蛋白提取物和第一沉淀物；使用NaCl溶液对第一沉淀物进行搅拌提取，获得球蛋白提取物和第二沉淀物；使用NaOH溶液对第二沉淀物进行搅拌提取，获得谷蛋白提取物和第三沉淀物；使用乙醇溶液对第三沉淀物进行搅拌提取，获得醇溶蛋白提取物。本发明提供的技术方案中，采用Osborne分级提取与等电点沉淀相结合的方法提取镉污染稻米中的镉结合蛋白，具有提取的蛋白种类更全面、蛋白纯度更高的优点，且提取效率高、操作简单。

技术领域

本发明涉及食品加工技术领域，特别涉及一种稻米中镉结合蛋白的提取分离方法。

背景技术

研究表明，在稻米中重金属镉主要和蛋白质以络合物的形式存在。目前对于稻米中镉结合蛋白的提取形式众多，如Osborne分级提取法、组织化学及溶剂提取法、碱液提取法和Tris-HCl提取法等。然而，上述稻米中镉结合蛋白的提取方法主要存在蛋白粗提物中杂质含量较高、蛋白纯度较低、以及蛋白种类较为单一、使用范围较窄的缺点。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，旨在解决现有稻米中镉结合蛋白的提取方法存在蛋白纯度较低、蛋白种类较为单一的问题。

为实现上述目的，本发明提出一种稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，包括以下步骤：

将镉污染稻米粉碎成稻米粉，然后将稻米粉加入到正己烷中，进行第一次搅拌提取后离心、干燥，得到脱脂稻米粉；

使用去离子水对脱脂稻米粉进行第二次搅拌提取后离心，获得第一上清液和第一沉淀物，将第一上清液的pH值调节至清蛋白对应的等电点，使清蛋白沉降，然后再次离心并收集清蛋白沉淀，获得清蛋白提取物；

使用NaCl溶液对第一沉淀物进行第三次搅拌提取后离心，获得第二上清液和第二沉淀物，将第二上清液的pH值调节至球蛋白对应的等电点，使球蛋白沉降，然后再次离心并收集球蛋白沉淀，获得球蛋白提取物；

使用NaOH溶液对第二沉淀物进行第四次搅拌提取后离心，获得第三上清液和第三沉淀物，将第三上清液的pH值调节至谷蛋白对应的等电点，使谷蛋白沉降，然后再次离心并收集谷蛋白沉淀，获得谷蛋白提取物；

使用乙醇溶液对第三沉淀物进行第五次搅拌提取后离心，收集滤液，将滤液的pH值调节至醇溶蛋白对应的等电点，使醇溶蛋白沉降，然后再次离心并收集醇溶蛋白沉淀，获得醇溶蛋白提取物。

优选地，所述镉污染稻米中的镉含量为0.5～1.0mg/kg。

优选地，所述NaCl溶液的质量浓度为4～6％；

所述NaOH溶液的摩尔浓度为0.01～0.03M，所述NaOH溶液的pH值为11；

所述乙醇溶液的体积分数为65～75％。

优选地，所述第一次搅拌提取至第五次搅拌提取的固液比均为1g：3～5mL，提取温度为20～28℃；

所述第一次搅拌提取至第三次搅拌提取、以及第五次搅拌提取的提取时间为3～5h，所述第四次搅拌提取的提取时间为0.3～0.7h。

优选地，将第一上清液、第二上清液、第三上清液及滤液的pH值对应调节至清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白对应的等电点的步骤，均采用HCl溶液调节溶液的pH值。

优选地，所述清蛋白、球蛋白、谷蛋白和醇溶蛋白对应的等电点pI分别为4.13、2.32、6.32和4.98。

优选地，所有所述离心的条件均为：离心转速2500～3500rpm，离心时间25～35min。