[发明专利]一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法

权利要求书

1.一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：其方法包括以下步骤：

A、预处理和外植体的取材与消毒；

B、将无菌外植体接种到诱导培养基内，得到愈伤组织；

C、丛生芽的诱导；

D、将得到的丛生侧芽接种到壮苗培养基内，以得到健壮试管苗；

E、生根培养；

F、自然驯化；

G、组培苗移栽。

2.根据权利要求1所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤A为：取生长状态良好的有分枝的直径约为2mm的壶瓶碎米荠根状茎，置于干净的碟子中晾放至茎尖和茎段稍微变软，用酒精棉轻轻擦拭壶瓶碎米荠根状茎表面的灰尘，再置于无菌玻璃瓶中，在超净工作台上用75％酒精和0.1％二氯化汞消毒，且用75％酒精消毒20～50s，用0.1％二氯化汞消毒20～40min，之后用无菌水冲洗4～5次，最后切成长度约为1cm备用。

3.根据权利要求1所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤B中的诱导培养基由红糖、6-苄氨基腺嘌呤、水解蛋白、琼脂、蔗糖、蒸馏水和激素2,4-D组成，其成分及含量为：红糖12～18g/L、6-苄氨基腺嘌呤2～6mg/L、水解蛋白3～7mg/L、琼脂6～8g/L、蔗糖20～30以及蒸馏水900～950、激素2,4-D 2.4～2.6mg/L。

4.根据权利要求1所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤C为：将愈伤组织放置于培养室，先暗室培养7天后转光照培养，光周期12小时/天，光照度1200～1500lx，室内温度控制在25±2℃内，7天后可见白色芽点转绿，30天后芽体伸长，35天后切下芽体转入增殖培养基得到丛生侧芽。

5.根据权利要求4所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述增殖培养基由6-苄基腺嘌呤、琼脂粉、二水氯化钙、蒸馏水、白糖和ZT组成，其成分及含量为：6-苄基腺嘌呤0.1～0.5mg/l、琼脂粉7～8g/L、二水氯化钙0.45g/L、蒸馏水900～950、白糖20g/L、ZT 0.5～1mg/L。

6.根据权利要求1所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤D中的壮苗培养基由1/2改良MS、CuSO4粉末、吲哚丁酸、活性炭、NiSO4粉末、琼脂和蒸馏水组成，其成分及含量为：1/2改良MS 0.2～0.3mg/L、CuSO4粉末0.75～0.95mg/L、吲哚丁酸1.0～2.0g/L、活性炭100ml/L、NiSO4粉末0.34～0.57mg/L、琼脂20g/L、蒸馏水900～950。

7.根据权利要求1所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤E为：将健壮试管苗从基部切下，插入生根培养基中培养至芽生根，得到生根幼苗。

8.根据权利要求7所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述生根培养基由MS培养基、琼脂、蔗糖、蛭石粉、小麦胚芽粉和蒸馏水组成，其成分及含量为：MS培养基0.5～1mg/L、琼脂5g/L、蔗糖30～40g/L、蛭石粉0.6～0.8g/L、小麦胚芽粉1～2g/L、蒸馏水700～850。

9.根据权利要求1所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤F为：生根培养25～30天后，已见不定根长出和后续的根原基萌发，瓶苗转到温室设施内接受自然光和温度的驯化，驯化期间温度在15～28℃范围内，光照在3000～5000lx范围内，驯化20～25天后出瓶移栽。

10.根据权利要求1所述的一种碎米荠的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤G为：待小苗叶片舒展，叶色浓绿，苗高3～5cm时，打开瓶盖炼苗2～4天后，将小苗植株上的琼脂和杂物洗净，移栽至消毒后的蛭石、泥炭土和珍珠岩的混合基质中，浇透水，盖上薄膜，保持湿度70％以上，置通风阴凉处，在24～26℃、光照1500～2500lx条件下培养8～12天后移至自然条件下生长。