[发明专利]莱茵衣藻核基因组PCR体系

说明书

本发明公开了一种莱茵衣藻核基因组PCR体系。所述的莱茵衣藻核基因组PCR体系中调控PCR缓冲液在22℃时的pH值为8.30～10.10。PCR缓冲液除包括Tris碱、KCl和MgClsubgt;2/subgt;外，还可以加入吐温‑20、甜菜碱、二硫苏糖醇、二甲亚砜和牛血清蛋白以及染料。本发明通过调控PCR缓冲液在22℃时的pH值，使得莱茵衣藻核基因组PCR反应可以得到很亮的条带，显著提高了PCR产量，且特异性好，有利于目标条带的鉴定。

技术领域

本发明涉及一种实验室的实验方法，具体来说是对莱茵衣藻核基因组PCR体系进行了优化，其中着重对缓冲溶液的pH值进行了调整。

背景技术

聚合酶链式反应(Polymer Chain Reaction，PCR)作为一种体外核酸扩增技术，是以特定的靶DNA片段为模板，以基因片段特异性的引物为延伸起点，在耐热DNA聚合酶催化下，通过反复的高温变性、低温退火、中温引物延伸等步骤，快速特异地体外复制出目的DNA片段，可以实现对特定核苷酸片段的指数级扩增。

莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)是一种单细胞模式绿藻，一般用来研究光合作用、叶绿体起源、鞭毛、细胞周期调控和有性生殖等。近年来，衣藻在生产重组蛋白和生物燃料方面的研究比较热门。衣藻的三种基因组(核基因组、质体基因组和线粒体基因组)包括了该物种各种生理活动的几乎全部信息。另外，衣藻具有生长速度快、培养方法简单、培养成本低廉等特点，是绿藻生物技术研究的有效参考物种。

莱茵衣藻核基因组PCR体系与其他物种类似，由引物、耐热DNA聚合酶、反应底物dNTPs、模板DNA、二价金属镁离子(Mg²⁺)、反应缓冲体系、其他DNA聚合酶稳定剂和PCR促进剂(例如甜菜碱)等组成。现存的已商业化的诸如爱必梦生物科技有限公司(abm)的2×TaqMaster Mix(2×Taq反应混合物)和普洛麦格生物技术有限公司(Promega)的Gotaq DNAPolymerase，按照相应的说明书操作，都可以得到相应的PCR目标产物。但是，各类商用PCR试剂中并没有涉及PCR缓冲液的具体配方。查找相关资料，我们发现，PCR缓冲液基本上是由10～50mM Tris碱、50mM以内KCl(也可以用(NH₄)₂SO₄)和1.5～2.0mMMgCl₂组成，pH值在8.30～8.80之间(20℃)。但是，针对莱茵衣藻核基因组的具体PCR体系尚未有文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高PCR产量的莱茵衣藻核基因组PCR体系。

实现本发明目的的技术方案如下：

莱茵衣藻核基因组的PCR体系，调节PCR缓冲液在22℃时的pH值为8.30～10.10。

优选地，调节PCR缓冲液在22℃时的pH值为8.90～9.80。

优选地，采用HCl调节PCR缓冲液的pH值。

优选地，所述的PCR缓冲液配方为10mM Tris碱、50mMKCl和1.5mM MgCl₂。

优选地，所述的PCR缓冲液里还含有体积浓度为0.1％的吐温-20(Tween-20)。

更为优选地，所述的PCR缓冲液里还含有0.54M甜菜碱、1.34mM二硫苏糖醇(DTT)、体积浓度为1.34％的二甲亚砜(DMSO)和11μg/ml牛血清蛋白(BSA)。

更为优选地，所述的PCR缓冲液里还可以加入染料。