[发明专利]三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球及制备方法

权利要求书

1.三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1)三羟甲基氨基甲烷与玉米醇溶蛋白的偶联反应：将玉米醇溶蛋白与氨基保护剂二碳酸二叔丁酯按质量比1:1～1.5:1，溶于特定的二甲基亚砜或者乙醇水溶液中，在25～40℃避光反应12～24h，得到玉米醇溶蛋白保护液；在氮气的保护下，分别往玉米醇溶蛋白保护液加入碳二亚胺盐、N-羟基琥珀酰亚胺及三羟甲基氨基甲烷，在25～40℃避光反应12～24h，得三羟甲基氨基甲烷-玉米醇溶蛋白溶液；

2)三羟甲基氨基甲烷-玉米醇溶蛋白的提取与纯化：在氮气的保护下，往所述的三羟甲基氨基甲烷-玉米醇溶蛋白溶液加入浓盐酸，在25～40℃避光反应6～8h；调节pH至5.0～6.0，转移至透析袋中透析，将透析袋中的保留液离心洗涤，冻干，得三羟甲基氨基甲烷-玉米醇溶蛋白；

3)载药微球的制备：将疏水性药物与冻干的三羟甲基氨基甲烷-玉米醇溶蛋白按质量比1:1～1:10，溶于乙醇水溶液；磁力搅拌下，注入pH为2.5～4.5的盐酸水溶液中，稳定后离心去上清，得载药微球；

4)载药微球功能化修饰：分别制备溶有不同的功能性分子溶液，将载药微球分散到含功能性分子的溶液，搅拌下反应后，离心去上清，获得功能性载药微球；所述的功能性分子为能够靶向癌细胞的cRGD肽、叶酸、Her2抗体、壳聚糖或具有抗氧化活性的儿茶素没食子酸。

2.根据权利要求1所述的三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于：步骤1)中，所述的碳二亚胺盐与玉米醇溶蛋白摩尔比为1:1～1.5:1；所述的N-羟基琥珀酰亚胺与玉米醇溶蛋白摩尔比为1.2:1～1.75:1；所述的三羟甲基氨基甲烷与玉米醇溶蛋白质量比为1:10～10:1。

3.根据权利要求1所述的三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于：步骤1)中，所述的碳二亚胺盐为二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；所述的玉米醇溶蛋白的蛋白纯度≥97％；所述的乙醇水溶液体积分数为50～95％。

4.根据权利要求1所述的三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于：步骤2)中，所述的浓盐酸的质量浓度为36.0～38.0％；所述浓盐酸的用量是三羟甲基氨基甲烷-玉米醇溶蛋白溶液体积的1/4～1/2；所述透析的时间为1～2天；所述离心洗涤的次数为3次以上。

5.根据权利要求1所述的三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于：步骤2)，步骤3)调pH值都采用浓度为0.1mol/L的HCl溶液或浓度为0.1mol/L的NaOH溶液调节。

6.根据权利要求1所述的三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于：步骤3)中，所述疏水性药物为苏尼替尼、吉非替尼、羟基喜树碱或白藜芦醇；所述的乙醇水溶液的体积分数为70～80％；所述盐酸水溶液的用量为5～20倍，稳定时间为1～2h。

7.根据权利要求1所述的三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于；cRGD肽、叶酸、Her2抗体和儿茶素没食子酸预先使用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺活化；壳聚糖预先在0.4mol/L的NaOH溶液下偶联一氯醋酸的壳聚糖。

8.根据权利要求7所述的三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于：活化的cRGD肽、叶酸、Her2抗体以及儿茶素没食子酸溶于pH值为8～10的碱性溶液，避光反应24～72h；一氯醋酸-壳聚糖溶于90℃的水溶液，避光反应1h。

9.根据权利要求8所述的三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球的制备方法，其特征在于：碱性溶液为PBS、Tris-HCl、HEPES及硼酸缓冲溶液的一种。

10.一种三羟甲基氨基甲烷改性玉米醇溶蛋白功能载药微球，其特征在于：其由权利要求1-9任一项所述制备方法制得，粒径为100～300nm，载药效率为81.48～86.01％，其功能性分子的接枝量平均为未改性玉米醇溶蛋白微球1.72～1.94倍。