[发明专利]一种肺癌实体瘤组织样本保存液

权利要求书

1.一种肺癌实体瘤组织样本保存液，其特征在于：所述样本保存液由胎牛血清、双抗P/S、HEPES和HBSS组成；其中，所述胎牛血清在所述样本保存液中的终浓度为1-5％(体积百分含量)；所述双抗P/S中的青霉素在所述样本保存液中的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素在所述样本保存液中的终浓度为100-200μg/mL；所述HEPES在所述样本保存液中的终浓度为8-12mM；余量均为HBSS。

2.权利要求1所述的样本保存液在保存肺癌实体瘤组织中的应用。

3.一种保存肺癌实体瘤组织的方法，包括如下步骤：将刚刚离体的肺癌实体瘤组织置于权利要求1所述的样本保存液中保存，保存时间为2小时以内。

4.一种从肺癌实体瘤组织中解离出肺癌实体瘤原代细胞的方法，包括如下步骤：

(1)将刚刚离体的肺癌实体瘤组织置于权利要求1所述的样本保存液中保存，2小时以内按照如下步骤对所述肺癌实体瘤组织进行解离前处理：用体积百分含量为70-75％的乙醇清洗肺癌实体瘤组织表面；用样本清洗液和无菌的PBS溶液先后清洗所述肺癌实体瘤组织；

(2)用样本解离液对步骤(1)处理后的所述肺癌实体瘤组织进行解离处理，获得肺癌实体瘤原代细胞；

所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶I在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶IV在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；余量均为PBS。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述样本清洗液由双抗P/S和PBS组成；其中，所述双抗P/S中的青霉素在所述样本清洗液中的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素在所述样本清洗液中的终浓度为100-200μg/mL；余量均为PBS。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：利用所述样本解离液对所述肺癌实体瘤组织进行解离是按照包括如下步骤的方法进行的：按0.1-0.3mL所述样本解离液每mg组织的用量，将剪碎后的所述肺癌实体瘤组织用事先37℃预热的所述样本解离液进行处理，在37℃条件下进行样本解离，解离时间15分钟至3小时。

7.根据权利要求4-6中任一所述的方法，其特征在于：在用所述样本解离液对所述肺癌实体瘤组织进行解离处理后还包括如下步骤：用消化终止液终止解离反应，收集细胞悬液；过滤所述细胞悬液，去除组织残片和粘连细胞；

具体的，所述消化终止液由胎牛血清、双抗P/S和DMEM培养基组成；其中，所述胎牛血清在所述消化终止液中的终浓度为8-12％(体积百分含量)；所述双抗P/S中的青霉素在所述消化终止液中的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素在所述消化终止液中的终浓度为100-200μg/mL；余量均为DMEM培养基。

8.一种用于从肺癌实体瘤组织中解离出肺癌实体瘤原代细胞的成套试剂，含有权利要求1中所述的样本保存液、权利要求4中所述的样本解离液和如下试剂中的至少一种：权利要求5中所述的样本清洗液和权利要求7中所述的消化终止液。

9.权利要求8所述的成套试剂在从肺癌实体瘤组织中解离出肺癌实体瘤原代细胞中的应用。

10.根据权利要求1-9中任一所述的样本保存液或方法或成套试剂或应用，其特征在于：所述肺癌为原发性肺癌，病理分期为II期或III期，病理分型为非小细胞肺癌或小细胞肺癌。