[发明专利]一种测定罗汉果中的罗汉果甜苷IIA含量的方法

说明书

本发明涉及一种测定罗汉果中的罗汉果甜苷IIA含量的方法，能筛选检测出具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性的罗汉果甜苷IIA，为研究和开发治疗II型糖尿病药物提供有效途径；罗汉果甜苷IIA的浓度在3.00mg.L^‑1～11.00mg.L^‑1内呈良好线性关系，相关系数r大于0.9994，检出下限（LOD，S/N=3）为0.42mg.kg^‑1，定量下限（LOQ，S/N=10）为1.40mg.kg^‑1，能满足罗汉果药材中罗汉果甜苷IIA含量的检测要求；本发明测定方法重复性良好，罗汉果甜苷IIA的RSD值为3.22%～3.68%。

技术领域

本发明属于罗汉果甜苷检测技术领域，具体涉及一种测定罗汉果中的罗汉果甜苷IIA含量的方法。

背景技术

罗汉果是葫芦科多年生藤本植物。其叶心形，雌雄异株，夏季开花，秋天结果。中医以其果实入药，含有罗汉果甜苷、多种氨基酸和维生素等药用成分，主治肺热痰火咳嗽、咽喉炎、扁桃体炎、急性胃炎、便秘等 。是中国广西桂林市著名特产。罗汉果甜苷又称为甜味素，因其甜度高、热量低而作为甜味剂广泛使用，常作为肥胖者和糖尿病患者的代用糖。

糖尿病是一种复杂的慢性代谢紊乱性疾病，每年发病率呈逐年上升趋势。α-葡萄糖苷酶是存在于小肠绒毛膜刷状缘上的催化淀粉、蔗糖和麦芽糖水解为葡萄糖和果糖的一组酶系，对调节体内碳水化合物的代谢具有重要的作用；α-葡萄糖苷酶抑制剂可以竞争性抑制α-葡萄糖苷酶的活性，阻断碳水化合物分解成单个葡萄糖，从而减缓淀粉和蔗糖等向葡萄糖的转化，进而控制餐后血糖的水平。α-葡萄糖苷酶抑制剂作为治疗II型糖尿病的有效药物类型，已越来越受到人们的关注。以α-葡萄糖苷酶为靶点筛选植物中具有调节血糖作用的活性物质，是研究和开发治疗II 型糖尿病药物重要的有效途径。

目前罗汉果甜苷的功效和开发利用价值还没有完全挖掘出来，还未见到筛选检测出具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的罗汉果甜苷的相关报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种操作简单、灵敏度高、可有效识别罗汉果甜苷IIA的一种测定罗汉果中的罗汉果甜苷IIA含量的方法。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：一种测定罗汉果中的罗汉果甜苷IIA含量的方法，包括以下步骤：

（1）罗汉果样品前处理：

1）烘干：将罗汉果样品洗净并于55℃～65℃下烘干，得到干燥的罗汉果样品；

2）粉碎：将干燥的罗汉果样品粉碎，得到罗汉果粉末；

3）超声波提取：将罗汉果粉末放入甲醇中超声波提取罗汉果甜苷IIA，超声波提取的工艺参数为：液料比为0.015g/ml～0.025g/ml，超声功率为120W，频率为35KHZ～45KHZ，时间为35min～45min，得到超声波提取液；

4）过滤：用0.40μm～0.50μm微孔膜过滤超声波提取液，得到待测样品；

（2）制备对照品溶液：将罗汉果甜苷IIA溶于甲醇中制备得到的罗汉果甜苷IIA对照品溶液；

（3）HPLC-MS法测定待测样品中罗汉果甜苷IIA含量：

1）液相色谱柱工艺参数：进样量为1μL，柱温为20℃～30℃，以甲醇和水做流动相，流速为0.8mL.min^-1～1.2mL.min^-1，洗脱模式为二元梯度洗脱，以55%甲醇等度洗脱；