[发明专利]一种DNA甲基转移酶活性的检测方法

说明书

本发明公开了一种DNA甲基转移酶活性的检测方法，包括如下步骤：1)以CpG甲基转移酶(M.SssI)为催化剂对HP1进行甲基化催化反应；2)失活M.SssI；3)在步骤2所得溶液中加入核酸内切酶HpaII；4)制备Au NPs‑HP2；5)将Au NPs‑HP2和切口酶Nt.AlwI加入步骤3所得溶液中；6)将氧化石墨烯加入步骤5所得溶液中，得到GO‑Au NPs样品溶液；7)采用紫外可见分光光度法分析GO‑Au NPs样品溶液，由此测定M.SssI的活性。本发明还提供了DNA甲基转移酶活性的检测方法的应用。本发明的检测方法易于操作，具有良好的灵敏度和选择性，在药物开发和临床诊断中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于光学生物传感技术领域，具体涉及一种基于氧化石墨烯(GO)和纳米金(Au NPs)的比色分析甲基转移酶活性方法。

背景技术

DNA甲基化是指供体S-腺苷甲硫氨酸(SAM)在DNA甲基转移酶(DNA MTase)的催化下向腺嘌呤或胞嘧啶转移甲基的过程。DNA MTase已被用作预测各种癌症(如肺癌，胃癌，结肠癌)类型中的生物标志物和潜在治疗靶标等等，由此可见检测甲基转移酶活性的重要性。到目前为止，各种开发的技术可以用于灵敏和选择性地检测CpG甲基转移酶(M.SssI)活性主要有Bergerat等(Bergerat，A.，Guschlbauer，W.，Fazakerley，G.V.，1991.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.88，6394-6397.)采用放射性同位素法检测M.SssI的活性，但放射性同位素标记的底物对生物组织有害；Cao and Zhang(Cao，A.，Zhang，C.-Y.，2012.Anal.Chem.84，6199-6205.)通过硫酸氢盐处理滚环扩增需要将胞嘧啶转化为尿嘧啶，检测时间过长；Lopez Torres等(Lopez Torres，A.，YanezBarrientos，E.，Wrobel，K.，Wrobel，K.，2011.Anal.Chem.83，7999-8005.)采用高效液相色谱法检测M.SssI的活性，但是该方法需要使用昂贵的仪器高效液相色谱仪，因此该检测方法不利于推广。因此，开发灵敏和简单的甲基转移酶活性测定方法迫在眉睫。

众所周知，纳米材料具有特定的物理和化学特性，这使其在测试DNA、癌症生物标志物和病毒方面显示出很多优势。纳米金(AuNPs)和氧化石墨烯(GO)是典型的光学纳米材料，具有良好的传感特性和易于合成的操作等优点，因此此类材料有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于氧化石墨烯(GO)和纳米金(Au NPs)的比色分析甲基转移酶活性方法，该方法避免了相对复杂的DNA设计和繁琐的实验操作，并使用简单的仪器，该方法适用于实际样品测试，具有良好的灵敏度和选择性。