[发明专利]一种金银忍冬茎尖超低温保存方法有效
| 申请号： | 201810367569.X | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN108371179B | 公开（公告）日： | 2020-11-13 |
| 发明（设计）人： | 宋红;田晓璇;李萍;李享 | 申请（专利权）人： | 东北林业大学 |
| 主分类号： | A01N3/00 | 分类号： | A01N3/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 150040 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 金银 忍冬 超低温 保存 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种金银忍冬茎尖超低温保存方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
(1)茎尖的剥离和预培养：在无菌条件下，将剥离后的茎尖放入预培养液中处理；所述的茎尖的剥离是指从含茎尖的无菌金银忍冬茎段上剥取的茎尖长度为2～3mm的含2个叶原基的离体茎尖；预培养液中蔗糖浓度为0.3mol/L的MS溶液，于4℃条件下预培养3d；
(2)装载：将预培养后的离体茎尖转接于LS装载液中，于室温下装载40min；所述的装载液的组成为：2M甘油+0.4mol/L蔗糖+MS的溶液；
(3)PVS2脱水处理：将装载后的茎尖放入PVS2保护液于0℃条件下脱水处理40min；所述的PVS2保护液的组成为：30％甘油+15％乙二醇+15％二甲基亚砜+0.4mol/L蔗糖+MS的溶液；
(4)液氮保存：将PVS2保护液处理后的茎尖更换新的PVS2保护液，然后迅速将冷冻管投入液氮中，保存24h；
(5)解冻：将液氮保存后的冷冻管取出进行化冻，所述的化冻方式为用40℃水浴中快速解冻70s；
(6)恢复培养：将卸载液洗涤后的茎尖转至恢复培养基上进行恢复培养；所述的卸载液组分为：1.2mol/L蔗糖+MS的溶液；所述的恢复培养基为MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA31.0mg/L；所述的恢复培养条件为：先在25℃培养箱中暗培养14d，然后转入正常光下进行培养。
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