[发明专利]一种适用于碱水环境下鱼类氨排泄率的测定方法

说明书

本发明公开了一种针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法；包括：将每尾鱼独立淡水稳定后，换同体积碱水胁迫，称量鱼体质量和体长；分别取胁迫前后的水样，每200mL水样中依次加入10μL试剂I、20μL试剂II、10μL试剂III后在25～35℃黑暗孵育；630nm波长下检测吸光值；标准曲线制作过程中采用改进标曲，标曲用水的碱度与实验水体浓度一致，分别将水样的吸光值代入氨氮浓度和吸光值的标准曲线方程，得出胁迫前后的水样中的氨氮浓度；按氨氮排泄率计算公式计算得到碱水环境下鱼类排氨率。本发明解决了常规测定方法在碱水环境下应用误差高的问题，提高测定准确率，为鱼类对碱性环境的适应机制研究提供基础技术。

技术领域

本发明涉及生理学领域，尤其涉及一种适用于鱼类氨排泄率的测定方法，具体来说是一种针对碱水环境下鱼类氨排泄率的测定方法。

背景技术

鱼类的氮废物排泄是鱼类能量代谢的重要环节，氨和尿素是蛋白和核苷酸代谢的重要产物，也是鱼类氮废物排泄的主要形式。鱼类氮废物排泄受N摄入量、水体pH、盐度、温度、环境NH₃和特殊行为等多种因素的影响。氨是鱼类主要的氮代谢终产物，它主要由肝脏、肾脏和肌肉中的α-氨基酸经脱氨基作用产生。海水和淡水硬骨鱼在水中以氨氮形式排泄氮废物，氨氮占总氮废物排泄的60-95％。氨不但可以以非离子形式的NH₃排泄，还可以离子形式的NH₄⁺排泄。

碱性环境会抑制氨排泄，从而使鱼体内血氨升高而对鱼体产生毒害作用。当淡水硬骨鱼暴漏于碱水中排氨率会立即降低，相对应的血浆氨浓度升高。造成排氨率降低的原因之一是高碱度导致鳃边界层用于捕获NH₃的合成NH₄⁺的H⁺减少。的平衡方程的pK大约为9.5(15℃)，环境中水的pH升高相应的鳃中水的pH升高或者使H⁺浓度降低，H⁺浓度降低使平衡朝向NH₃合成。鳃中水的pH升高降低了ΔpH，从而降低了排氨率。

因此测定碱性环境下氨排泄的变化对于揭示鱼类对碱性环境的适应机制极为重要。目前用于测定水环境中氨浓度主要采用Berthelot反应：氨、苯酚和次氯酸盐在碱性环境下发生反应，生成蓝色的靛酚。这种方法可以直接检测淡水和海水中的氨，且对氨检测的特异性较高，有机氮、亚硝酸盐和硝酸盐等含氮化合物对检测影响很小。但是这一方法直接应用碱水环境时则误差较大，目前尚缺少有针对碱水(pH＞9.0)环境下鱼类排氨率的测定的有效方法。

发明内容

本发明的目的是建立一种针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，解决了常规测定方法在碱水环境下应用误差高的问题，提高测定准确率，为鱼类对碱性环境的适应机制研究提供基础技术。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明涉及一种针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，所述测定方法包括如下步骤：

1)将每尾鱼独立用淡水稳定预设时间t1后，换同体积碱水胁迫预设时间t2；称量鱼体质量和体长；

2)分别取步骤1)胁迫前后的水样，每200mL水样中依次加入10μL试剂I、20μL试剂II、10μL试剂III后在25～35℃黑暗孵育；所述试剂I为苯酚的乙醇溶液，试剂III为硝普钠水溶液，试剂II为2∶1的二氯异氰尿酸钠水溶液和柠檬酸钠/NaOH水溶液的混合溶液；

3)630nm波长下检测吸光值；分别将水样的吸光值代入氨氮浓度和吸光值的标准曲线方程，得出步骤1)胁迫前后的水样中的氨氮浓度；

4)按如下式所述的氨氮排泄率计算公式计算得到碱水环境下鱼类排氨率；