[发明专利]一种适用于碱水环境下鱼类氨排泄率的测定方法

权利要求书

1.一种针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括如下步骤：

1)将每尾鱼独立用淡水稳定预设时间t1后，换同体积碱水胁迫预设时间t2；称量鱼体质量和体长；

2)分别取步骤1)胁迫前后的水样，每200mL水样中依次加入10μL试剂Ⅰ、20μL试剂Ⅱ、10μL试剂Ⅲ后在25～35℃黑暗孵育；所述试剂Ⅰ为苯酚的乙醇溶液，试剂Ⅲ为硝普钠水溶液，试剂Ⅱ为体积比为2:1的二氯异氰尿酸钠水溶液和柠檬酸钠/NaOH水溶液的混合溶液；

3)630nm波长下检测吸光值；分别将水样的吸光值代入氨氮浓度和吸光值的标准曲线方程，得出步骤1)胁迫前后的水样中的氨氮浓度；

所述标准曲线方程是基于改进标曲获得的，所述改进标曲用水的碱度与碱水环境中的碱水浓度一致；所述标准曲线方程是通过包含如下步骤的方法获得的：

A1、配制标准溶液：NH₄Cl 100～110℃烘2～4h，配制成浓度为1mM的标准液；然后加入无氨水配制成100μM的标准溶液备用；

A2、通过将标准溶液和碱水混合分别配制氨氮浓度为0μM、3μM、6μM、9μM、12μM、15μM、18μM、21μM、24μM、27μM、30μM的标准样品；

A3、分别取步骤A2中各氨氮浓度的标准样品，每200mL标准样品中依次加入10μL试剂Ⅰ、20μL试剂Ⅱ、10μL试剂Ⅲ后在25～35℃黑暗孵育；

A4、630nm波长下检测吸光值，获得吸光值与氨氮浓度的标准曲线方程；

4)按如下式所述的氨氮排泄率计算公式计算得到碱水环境下鱼类排氨率；

其中，A_ER为氨氮排泄率，单位为μmol N/kg/h；[Tamm]i和[Tamm]f分别为初始和结束总氨氮浓度，单位为μmol N/L；V为水体体积，单位为L；Δt为排泄初始和结束时间差，单位为h；m为鱼体体重，单位为kg。

2.根据权利要求1所述的针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，其特征在于，标准样品中加入的碱水与步骤1)中的碱水的碱度一致。

3.根据权利要求1所述的针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，其特征在于，步骤1)中，所述预设时间t1为6-8h，所述预设时间t2为24-96h，期间每24h换水一次。

4.根据权利要求1所述的针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述苯酚的乙醇溶液是在每100mL95％乙醇溶解入10g苯酚制备而得。

5.根据权利要求1所述的针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述硝普钠水溶液是在每100mL去离子水中溶解入0.5g制备而得。

6.根据权利要求1所述的针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述二氯异氰尿酸钠水溶液是在每100mL去离子水中溶解入0.4g二氯异氰尿酸钠制备而得；所述柠檬酸钠/NaOH水溶液是在每100mL去离子水中溶解入40g柠檬酸钠和3.2g NaOH制备而得。

7.根据权利要求1所述的针对碱水环境下鱼类排氨率的测定方法，其特征在于，步骤2)中，所述孵育时间为0.5～1.5h。