[发明专利]肺小细胞癌早期特异性自身抗体panel诊断试剂盒

权利要求书

1.一种早期诊断肺小细胞癌的标志物组合，其特征在于，该组合为血清中的KRT8自身抗体、CDC20 自身抗体和POLDIP3自身抗体的组合。

2.权利要求1所述的标志物组合在小细胞肺癌的早期诊断试剂或试剂盒中的应用。

3.一种用于早期诊断肺小细胞癌的试剂盒，其特征在于，包括产生KRT8、CDC20和POLDIP3自身抗体的抗原。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括1M碳酸氢钠缓冲液，PBST缓冲液，酶标抗体，TMB底物，终止液，ELISA panel板。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PBST是含5％脱脂奶粉的PBST。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述含5％脱脂奶粉的PBST配制方法为：取5 g脱脂奶粉，加入100 ml PBST中，配制成为5％脱脂奶粉的PBST。

7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体为HRP标记的抗待测抗体的种属来源的IgG的抗体。

8.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述终止液为2M H₂SO₄终止液。

9.如权利要求3～8任一项所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒的操作方法为：

1）包被：用1M的碳酸氢钠缓冲液将肺癌抗原KRT8 、CDC20 和POLDIP3分别以

5 ug/ml、5 ug/ml和2.5 ug/ml的最佳包被浓度包被于ELISA板，4℃过夜，然后使用5%脱脂奶粉的PBST封闭1.5小时；

2）加样：用含5％脱脂奶粉的PBST将待测样品血清1：100稀释，然后取100 μL/孔加入上述包被有抗原的微孔板中，37℃孵育30 min，PBST洗涤5遍；

3）加HRP标记的抗体：除空白孔外，各反应孔中分别加入100 μl HRP标记的抗待测抗体的种属来源的IgG的抗体，37℃孵育30 min，去除液体，并用PBST洗涤5遍；

4）加显色底物：在各反应孔中加入TMB底物，37℃显色15 min；

5）终止反应：在各反应孔中加入2M H₂SO₄终止液；

6）结果判定：在MD-SpectraMax M5多功能酶标仪上，于波长450 nm和630 nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，将三种标志物的OD值带入方程，得到的p值≥cutoff值0.43，即为阳性结果，当p值＜cutoff值0.43时，为阴性结果；

步骤6）所述方程为采用logistic回归方法建立回归方程，具体为：

ln（p/1-p)=0.727+46.3×OD_POLDIP3+29.43× OD_CDC20+20.53×OD_KRT8。