[发明专利]包含家蝇抗菌肽基因的重组载体、菌株及其表达和应用在审
| 申请号： | 201810355337.2 | 申请日： | 2018-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN108315345A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 徐楠;吴建伟;彭建 | 申请（专利权）人： | 贵州博康生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;C07K14/435;C12P21/00;A23K10/18;A23K20/147;A23K50/75;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京联创佳为专利事务所(普通合伙) 11362 | 代理人： | 郭防 |
| 地址： | 550081 贵州省贵阳市*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 家蝇抗菌肽 重组酵母菌株 重组载体 家禽饲料添加剂 表达产物 家蝇抗菌肽基因 应用 重组酵母菌 发酵水平 灭活菌体 念珠菌病 生产效率 基因 菌株 发酵 家禽 防治 | ||
1.一种包含家蝇抗菌肽MAF-1基因的重组载体，其特征在于，所述载体是毕赤酵母表达载体。
2.根据权利要求1所述的包含家蝇抗菌肽MAF-1基因的重组载体，其特征在于，所述重组载体的制作方法如下：
(1)将编码家蝇抗菌肽MAF-1的基因插入质粒pPink-HC上的CYC1和ADE2限制性酶切位点之间，得到穿梭质粒pPink-HC-MAF-1；
(2)将穿梭质粒pPink-HC-MAF-1电穿孔转入毕赤酵母野生型P1酵母菌，使穿梭质粒pPink-HC-MAF-1的ADE2基因插入酵母表达载体pPICZaA中的ADE2缺陷位点并与酵母表达载体pPICZaA连接，即得重组酵母表达载体。
3.一种含有权利要求1或2所述的包含家蝇抗菌肽MAF-1基因的重组载体的重组酵母菌株。
4.根据权利要求3所述的包含家蝇抗菌肽MAF-1基因的重组载体的重组酵母菌株，其特征在于，重组菌株是毕赤酵母野生型P1菌株。
5.一种表达家蝇抗菌肽MAF-1的方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)权利要求3或4所述的重组酵母菌株在摇瓶或发酵罐中进行发酵，诱导重组酵母菌株表达家蝇抗菌肽MAF-1；
(2)发酵结束后，将重组酵母回收破碎离心后取上清，回收并纯化所表达的抗菌肽MAF-1。
6.根据权利要求5所述的表达家蝇抗菌肽MAF-1的方法，其特征在于：所述发酵诱导重组酵母菌株表达家蝇抗菌肽MAF-1的条件为30％～50％甲醇，30～32℃，搅拌速率250～350rmp，发酵时间为24～72小时。
7.权利要求3或4所述的重组酵母菌株在家禽饲料添加剂中的应用，其特征在于：采用权利要求5步骤(1)中所述发酵诱导表达后的重组酵母菌制成干燥灭活菌体作为所述家禽饲料添加剂的活性成分。
8.根据权利要求5所述的表达家蝇抗菌肽MAF-1的方法所获得的家蝇抗菌肽MAF-1在家禽饲料添加剂中的应用。
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