[发明专利]一种测定氧气产生速率的方法

说明书

本发明属于生物领域，尤其涉及一种测定氧气产生速率的方法。该方法包括以下步骤：a)提供容器和溶解氧仪；b)在所述容器中充满底物溶液，对所述容器曝非氧气体，同时启动所述溶解氧仪，待所述溶解氧仪检测到的溶解氧浓度降至稳定后，停止曝气，密封曝气口；c)将密封好的容器至于反应环境中，向所述容器中注入新鲜提取的微生物蛋白粗提物，密闭反应，记录反应时间与对应的溶解氧浓度，计算得到微生物体内酶的氧气产生速率。或，将上述步骤中的底物溶液替换为含光合作用生物或其组织的营养液，且不再注入微生物蛋白粗提物，计算得到光合作用生物或其组织的氧气产生速率。本发明提供的方法可准确测定生物体系在检测全过程中的氧气产生速率。

技术领域

本发明属于生物领域，尤其涉及一种测定氧气产生速率的方法。

背景技术

在微生物和光合作用生物科学研究中，经常需要测定新陈代谢过程中的产氧量及其进程。在微生物中，以异化(高)氯酸盐还原菌为例，需要测定微生物体内酶的产氧速率，以此得到微生物中亚氯酸盐歧化酶的活性；在光合作用生物中，经常需要测定植物小型组织、细胞团、细胞悬浮系统、细胞器(如叶绿体)，或者完整有机体，如微藻的氧气产生速率，以此来评价：光合作用生物的供氧能力。因此，寻找到一种合适的测定生物系统中氧气产生速率的方法，成为众多研究者的目标。

目前测定微生物体内酶的产氧速率，主要采用美国YSI生物耗氧分析仪，通过测定不同时间溶液中的溶解氧量，计算得到产氧速率；测定植物小型组织、细胞团、细胞悬浮系统、细胞器(如叶绿体)，或微藻的氧气产生速率，主要是通过溶氧仪或者碘量法，通过测定不同时间溶液中的溶解氧量，计算得到产氧速率。但使用美国YSI生物耗氧分析仪测定微生物体内酶的产氧速率时，反应开始后的前5～10s的数据无法收集；而使用溶氧仪或者碘量法直接测定溶液中的溶解氧量时，整个测定过程溶液样品与空气接触，所测结果不是完全意义上的水样中的溶解氧量，从而影响氧气产生速率的准确性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种测定氧气产生速率的方法，本发明提供的方法可准确测定生物体系在检测全过程中的氧气产生速率。

本发明提供了一种测定微生物体内酶氧气产生速率的方法，包括以下步骤：

a1)提供容器和溶解氧仪；所述容器上设置有曝气口和检测口；所述溶解氧仪的溶氧探头通过所述检测口伸入到容器中；

b1)在所述容器中充满底物溶液，通过曝气口对所述容器曝非氧气体，同时启动所述溶解氧仪，待所述溶解氧仪检测到的溶解氧浓度降至稳定后，停止曝气，密封曝气口；

c1)将密封好的容器至于反应环境中，向所述容器中注入新鲜提取的微生物蛋白粗提物，密闭反应，记录反应时间与对应的溶解氧浓度，计算得到微生物体内酶的氧气产生速率。

本发明提供了一种测定光合作用生物或其组织氧气产生速率的方法，包括以下步骤：

a2)提供容器和溶解氧仪；所述容器上设置有曝气口和检测口；所述溶解氧仪的溶氧探头通过所述检测口伸入到容器中；

b2)避光条件下，在所述容器中充满含光合作用生物或其组织的营养液，通过曝气口对所述容器曝非氧气体，同时启动所述溶解氧仪，待所述溶解氧仪检测到的溶解氧浓度降至稳定后，停止曝气，密封曝气口；

c2)将密封好的容器至于光照环境中培养，记录培养时间与对应的溶解氧浓度，计算得到光合作用生物或其组织的氧气产生速率。

优选的，所述溶解氧仪为哈希HQ30d便携式溶解氧仪；

所述溶氧探头为LDO溶氧探头。

优选的，所述曝气口通过橡胶塞密封。

优选的，所述氧气产生速率按照式(I)进行计算：