[发明专利]一种细胞色素c检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种细胞色素c检测方法及试剂盒，将细胞色素c固有的过氧化物酶活性与丝网印刷碳电极检测技术相结合，构建一种原位的细胞色素c的检测方法，而且无需破坏性样品，具有原位检测的优点；并且具有更好的检测性能、较高的灵敏度，检测限为0.816nM，过程简单、快速，可进行实地检测。

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及一种细胞色素c检测方法及试剂盒。

背景技术

细胞色素c由铁、蛋白质和卟啉构成，是线粒体呼吸链的重要组成和指示细胞凋亡的标志物。此外，细胞色素c还有许多其他重要的作用，例如协助微生物将胞内氧化有机物产生的电子转移至难溶性金属(氢)氧化物和固体电极。

传统细胞色素c检测方法，如血红素染色和蛋白质印迹，具有可视化和定量的优势，但是它们的灵敏度低和检测过程复杂。光谱法虽然简单易用，但仅限于定性监测细胞色素c的氧化还原状态。电化学技术由于其简单的操作、高灵敏度和定量分析的优点，被应用于细胞色素c的检测。然而，电化学技术依赖于昂贵的酶或金属纳米粒子进行信号放大。此外，由于它们在电极/溶液界面处的电子转移速率较低，需要复杂繁琐的电极预处理和修饰过程。为了克服这些不足，需要发展一些细胞色素c检测的新方法，例如探索细胞色素c可能存在的生物活性，通过检测其底物分子而实现对细胞色素c的检测。有研究表明，细胞色素c的血红素辅基在结构上与过氧化物酶的相似(均含有与卟啉配位的Fe(III)和一个或两个轴向配体)，因而具有类过氧化物酶活性。实际上，血红素的类过氧化物酶活性已被应用于凝胶染色和比色检测的显色反应。这些检测方法的显色反应需要使用一种具有氧化还原活性的底物分子，名为3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)。研究表明四甲基联苯胺具有可逆的电化学活性。目前还没有报道利用细胞色素c的过氧化氢酶活性进行原位电化学检测。因此，可以开发出一种新型的微生物细胞色素c原位快速检测方法具有重大意义。

发明内容

针对现有技术中所存在的不足，本发明的目的在于将细胞色素c固有的过氧化物酶活性与丝网印刷碳电极检测技术相结合，构建一种原位的细胞色素c检测方法。该方法具有特异性高，操作简单，检测迅速的优点。

本发明的目的在于提供一种细胞色素c检测方法。

本发明的另一目的在于提供一种细胞色素c检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种检测细胞色素c的试剂盒，由洗涤缓冲液、丝网印刷碳电极、过氧化氢溶液、检测

缓冲液和四甲基联苯胺粉末制成。

进一步的，所述的洗涤缓冲液是0.01M～0.03M、pH 5.4～9.4的磷酸盐缓冲液。

进一步的，所述的检测缓冲液是0.1M～0.3M、pH 3.0～7.0的磷酸柠檬酸缓冲液。

一种检测细胞色素c的检测方法，包含以下步骤：

1)将待测微生物细胞液滴加到丝网印刷碳电极的工作电极表面，干燥，制成微生物修饰的丝网印刷碳电极；

2)将四甲基联苯胺溶液滴加到微生物修饰的丝网印刷碳电极，反应至11分钟时，用仪器进行电化学反应检测，检测其产生的电流强度；

3)根据电流强度分析判断待测细胞中是否含有细胞色素c。

进一步的，步骤1)所述的微生物细胞液由微生物细胞和PBS缓冲液组成。

进一步的，步骤1)所述的干燥温度为18～27℃。

进一步的，步骤1)所述的干燥时间为60～120min。

进一步的，步骤2)所述仪器为电化学工作站。

进一步的，步骤2)中，进行电化学反应检测的电压为-0.30V～-0.10V。