[发明专利]抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体的制备方法及其应用。公开该抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体及其重链可变区和轻链可变区的DNA序列和氨基酸序列。设计了所述的抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体的制备方法。将所述的抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体在免疫学检测、抗原或抗体检测试剂盒中应用。该抗HPV16 L1蛋白的单克隆抗体能够特异性识别HPV16这一主要的流行亚型，与HPV16假病毒以及HPV16 L1蛋白都具有良好的反应性，与其他亚型的L1蛋白没有交叉反应。为进一步改造其抗体可变区序列制备不同组合形式的基因工程抗体和进行HPV不同亚型病原的临床检测研究奠定了良好的基础。

技术领域

本发明涉及生物免疫技术领域，具体涉及一种抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体的制备方法及其应用。

背景技术

人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）是无包膜的、20面体双链闭合环状DNA病毒，具有严格的种属特异性，主要感染人的皮肤和粘膜组织，可以通过性接触、皮肤接触和阴道分娩的微创伤口而感染，引起相应部位上皮组织的增生性病变。

HPV病毒衣壳由主要衣壳蛋白（L1）和次要衣壳蛋白（L2）组成。其中，L2蛋白为次要衣壳蛋白是高度可变核蛋白，反映HPV抗原的多态性。而L1蛋白是HPV病毒的主要衣壳蛋白，约占病毒蛋白总量的80%，为高度保守的糖蛋白，分子量为55～60kDa，具有高度的免疫原性，也是HPV分型的依据。其中，HPV16是国际公认的感染率最高的一个亚型。按感染部位分类， HPV16归类为黏膜型病毒；按发癌性分类，HPV16归类为高危型病毒。在HPV16 L1蛋白中共有12个相对保守的半胱氨酸（cysteine，Cys，C）残基，其中Cys175与Cys428在所有HPV亚型中都很保守，二者间形成链内的二硫键，参与病毒样颗粒（virus-like particles，VLPs）的形成及病毒粒子稳定性的维持。

研究显示体外表达的HPV L1蛋白可自组装成VLPs结构。这种体外组装的VLPs结构与55 nm的天然的HPV病毒结构没有什么差别，经免疫后可诱导机体产生型别特异性中和抗体，可有效保护机体免受同型病毒的感染，因此这种基于VLPs结构的疫苗常用于预防HPV病毒感染。因此，HPV L1蛋白是研究HPV VLPs疫苗的关键，快速、特异、敏感的L1蛋白检测方法对研究HPV VLPs疫苗具有重要的意义。

目前检测HPV的方法主要有免疫组化、分子杂交、PCR等。由于HPV基因在体内以游离体或整合于宿主染色体的整合形式存在，上述形式下均无或仅有少量的外壳蛋白存在，因此在病变组织中很难分离到HPV的天然病毒，因此HPV病毒抗原蛋白的检测在临床上很难得到应用。

而HPVL1蛋白检测技术的相关研究也相对较滞后。目前市场上的抗HPV16L1蛋白的单抗用ELISA及Western Blot检测显示与其他亚型HPV的L1蛋白都有交叉反应。

因此，目前亟需制备出一种可以同时用ELISA、Western Blot等检测方法特异性识别HPV16亚型的L1蛋白的单克隆抗体，进而确定其重链可变区序列和轻链可变区序列以改造其抗体可变区序列制备不同组合形式的基因工程抗体，以期进一步提升抗体的特异性和亲和力。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体，为基于HPV L1蛋白的疫苗研制提供便利；公开了一种制备抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体的方法，该方法简单便捷；并将抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体在在免疫学检测中应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

筛选一种抗HPV16 L1蛋白单克隆抗体，其重链可变区DNA序列为如SEQ ID NO.1所示的序列；其重链可变区氨基酸序列为如SEQ ID NO.2所示的序列，或在所述SEQ ID NO.2序列的基础上进行一个或多个氨基酸的添加、删除、替换而获得活性片段或保守性变异体的序列；和/或