[发明专利]检测YAP K342甲基化修饰的试剂及其应用

说明书

本发明公开了检测YAP K342甲基化修饰的试剂及其应用。具体公开了YAP K342甲基化修饰作为肿瘤诊断和预后分析标志物，尤其用于肺癌和肠癌肿瘤的诊断和预后。本发明发现YAP发生单甲基化修饰的位点K342，并且制备K342甲基化修饰多克隆抗体，实验显示YAP K342甲基化修饰在肺癌和肠癌中呈现特异性高表达现象，而在正常组织中没有这种特异性高表达现象。并且K342甲基化修饰与肿瘤病人预后呈明显负相关。因此YAP K342甲基化修饰可作为肿瘤诊断和预后分析的标志物，尤其是作为肺癌和肠癌诊断的标志性物质，能够明确清楚地表征肿瘤的发生与不良预后。本发明为临床诊断与治疗方案提供了重要参照依据。

技术领域

本发明涉及肿瘤标志物技术领域，尤其涉及检测YAP K342甲基化修饰的试剂在肺癌和肠癌早期诊断及预后中的应用。

背景技术

肿瘤作为重大疾病，严重危险人类健康与生命。我国的癌症病人在发现癌症时，大多数已到中晚期，或者已经转移。因此，肿瘤的早期诊断对于肿瘤的防治与治疗具有重要意义，长期以来寻找能早期诊断的肿瘤标志物成为肿瘤研究关注的焦点之一。虽然目前已经研究出多种肿瘤标志物，包括肿瘤胚原性抗原(AFP)、肿瘤抗体CA、癌基因或者抑癌基因等等。然而，这些肿瘤标志物检测假阳性比率仍非常高，尤其是各种恶性肿瘤标志物尚未真正发现，这给肿瘤诊断和治疗带来了难题。

Hippo信号通路是近年来发现的重要的信号通路，主要通过细胞增殖和凋亡进行调控器官发育。Hippo信号通路与肿瘤的发生发展密切相关。YAP作为Hippo信号通路下游重要的信号因子，参与维持器官大小和组织稳态。近年来的研究报道表明，在微环境因子直接或间接的影响下，Hippo信号通路失活，导致下游效应因子YAP活性持续增强，参与肿瘤发生发展。Hippo信号通路调节异常与多种肿瘤相关，如乳腺癌，胰腺癌，胃癌，肝癌和肺腺鳞癌转分化等。因此，进一步探讨YAP与肿瘤发生发展的关系，对于肿瘤的诊断治疗及预后分析研究具有重要意义。

中国专利2015104636167公开YAP1基因在阿尔茨海默病诊治中的应用，具体公开YAP1基因可以作为阿尔茨海默病早期诊断的分子标志物，QPCR实验证明与正常人群相比，阿尔茨海默病患者血液中的YAP1基因表达显著升高。中国专利2017100627435公开YAP1基因及抑制剂在增强膀胱癌干细胞化疗敏感性中的应用，具体公开YAP1基因及抑制剂在增强膀胱癌干细胞化疗敏感性中的应用，实验证明YAP1基因与膀胱癌干细胞化疗敏感性有关，YAP1基因高表达的抑制剂可以通过下调YAP1基因表达提高膀胱癌干细胞对化疗药物丝裂霉素C和顺铂的化疗敏感性，提高化疗药物丝裂霉素C和顺铂对膀胱癌干细胞的抑制率。现有技术中，关于本发明肿瘤诊断及预后分析标志物---YAP K342甲基化修饰，目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肿瘤诊断和预后分析的标志物，尤其是作为肺癌和肠癌诊断的标志性物质，能够明确清楚地表征肿瘤的发生与不良预后。

本发明的第一个目的，提供检测SET1A表达的试剂或检测YAP K342甲基化修饰的试剂在制备检测肺癌或肠癌的试剂盒中的应用。

本发明的第二个目的，提供检测SET1A表达的试剂或检测YAP K342甲基化修饰的试剂在制备检测肺癌或肠癌患者预后的试剂盒中的应用，所述SET1A和YAP K342甲基化修饰在肿瘤组织中明显高表达，同时与肿瘤病人预后呈明显负相关。

作为本发明的一个优选实施方案，所述检测YAP K342甲基化修饰的试剂为YAPK342甲基化修饰特异性抗体。

作为本发明的一个优选实施方案，所述检测SET1A表达的试剂为SET1A蛋白的特异性抗体。

作为本发明的一个优选实施方案，所述特异性抗体制备方法如下：将抗原多肽与载体蛋白钥孔血蓝蛋白偶联形成抗原并免疫宿主动物，通过特异性亲和纯化方法获得特异性识别K342甲基化修饰的抗体。K342甲基化修饰多克隆抗体，特异性识别肿瘤组织中的YAP甲基化修饰水平。