[发明专利]一种抗病毒蛋白MxA诊断试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种抗病毒蛋白MxA诊断试剂盒及其制备方法，其特征是运用量子点技术、微球技术、中频超声技术、悬浮技术、封闭技术、标记技术，制备了一种MxA诊断试剂盒，适用范围宽、可用于临床、操作简单、精密度高、检测用时较短、灵敏度高、有效期长、成本低廉、作用安全，取得了满意效果。

技术领域

本发明涉及诊断试剂盒制备领域，具体涉及一种抗病毒蛋白MxA诊断试剂盒及其制备方法。

背景技术

MxA是由干扰素（IFN）诱导产生的一种78kD抗病毒蛋白，是区分机体是否受到病毒感染亦或细菌感染的特异性指标，同时也是评价干扰素治疗效果的重要标准。快速检测机体MxA水平对于疾病诊断、合理用药、评价疗效具有重要意义。现有的MxA诊断试剂盒多为酶联免疫法，存在适用范围窄、不可用于临床、操作复杂、精密度低、耗时较长、灵敏度低、有效期短、成本高、作用不安全等不足。本发明依据多年诊断试剂盒研发经验，综合运用量子点技术、微球技术、中频超声技术、悬浮技术、封闭技术、标记技术，提供了一种MxA诊断试剂盒制备方案，适用范围宽、可用于临床、操作简单、精密度高、用时较短、灵敏度高、有效期长、成本低廉、作用安全，取得了满意效果。

发明内容

本发明提供一种MxA诊断试剂盒及其制备方法。

发明实施方案如下：

量子点荧光微球混悬液的制备：

取4ml浓度为5mg/ml的 CdSe/ZnS量子点甲苯溶液，13000转离心10 分钟，弃去上清液，得沉淀，加入含120mg聚甲基丙烯酸甲酯和80mg聚马来酸酐十八醇酯的三氯甲烷液2ml，加入浓度为3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液5ml，混合10～20分钟，置超声反应器中，选择频率25kHz超声匀质2分钟，得乳液，室温100转旋蒸4小时，除去三氯甲烷，剩余液体10000转离心10分钟，得沉淀，用5ml注射用水10000转离心10分钟洗涤两次，加0.2%叠氮钠水溶液2ml，置超声反应器中，选择频率45kHz超声1～2分钟，得浓度为10mg/ml的量子点荧光微球混悬液，2℃～8℃ 贮藏；

量子点荧光微球标记探针的制备：

取0.1ml浓度为10mg/ml的量子点荧光微球混悬液，4℃10000转离心10分钟，得沉淀，加入1ml浓度为10mMol、pH值为6.5的磷酸缓冲液使悬浮，加入150μg碳二亚胺，混合10～20分钟，加入100μgN-羟基琥珀酰亚胺，混合10～20分钟，室温反应40分钟，4℃10000转离心10分钟，得沉淀，加入1ml浓度为10mMol、pH值为6.5的磷酸缓冲液使悬浮，加入100μg的抗MxA单克隆标记抗体，混合10～20分钟，室温搅拌反应60分钟，4℃10000转离心10分钟，得沉淀，加入1ml含0.5%牛血清白蛋白，20mMol乙醇胺的浓度为10mMol、pH值为7.5的磷酸缓冲液使悬浮，混合10～20分钟，室温旋蒸反应2小时，4℃10000转离心10分钟，得沉淀，置超声反应器中，加入0.1ml浓度为10mMol、pH值为6.5的磷酸缓冲液，选择频率45kHz超声1分钟，使悬浮，2℃～8℃贮藏，得量子点荧光微球标记探针；

NC膜的喷涂划线：

将浓度为0.5mg/ml的羊抗鼠二抗以1μl/mm的喷量喷涂于NC膜的质控线，将浓度为1mg/ml的鼠抗人MxA单克隆包被抗体以1μl/mm的喷量喷涂于NC膜的检测线，质控线与检测线相距4mm，37℃ 干燥12小时，得喷涂后的NC膜；

量子点荧光微球标记垫的制备：

取量子点荧光微球标记探针，10000转离心10分钟，得沉淀，置超声反应器中，加入0.1ml含5%蔗糖，1%牛血清白蛋白，0.5%吐温-20，1%聚乙二醇2000,浓度为10mMol、pH值为7.4的磷酸缓冲液，选择频率60kHz超声1分钟，使悬浮，以5μl/cm的喷量喷涂于标记垫上，37℃ 干燥12小时，得量子点荧光微球标记垫；