[发明专利]小分子诱导人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞的方法

说明书

本发明公开了一种完全利用小分子诱导人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞(LCs)的方法。该方法步骤如下，首先分离提取人脂肪干细胞并完成鉴定；然后采用特定培养基诱导人脂肪干细胞分化，同时在不同时间点向培养基中外加一定量小分子包括：SAG、22OHC、Li、PDGF‑AA、FGF2、Androgen、LH促进分化；最后采用手工剔除非睾丸间质细胞(ALCs)样细胞富集分化靶细胞(ADSC‑ALCs)，并完成鉴定。按照本发明方法诱导，可以成功将人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞，从而为采用细胞移植治疗睾酮缺乏症提供细胞来源。

技术领域

本发明属于生物科技技术领域，尤其是一种完全利用小分子诱导人源脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞的方法。

背景技术

男性生殖健康离不开生殖系统的功能健全。目前，雄激素缺乏症的治疗方法仅停留在雄激素替代治疗。然而，长期的雄激素治疗会引起肝肾功能损伤、免疫力降低、水钠潴留等并发症，而且不受自身昼夜节律的调控。目前，医学研究一大热点是细胞替代疗法。虽然睾丸间质细胞(Leydig cell,LCs)移植可以避免外源性雄激素替代治疗带来的某些并发症，但是睾丸间质细胞(Leydig cell,LCs)来源不足和异体移植可能导致宿主免疫排斥反应限制了睾丸间质细胞(Leydig cell,LCs)在临床上的应用。目前，诱导干细胞(全能干细胞和成体干细胞)分化为睾丸间质细胞，作为供体移植有望成为解决问题的突破口。

近年来，生物学家对脂肪间质干细胞的研究有了较大的突破和发展。如中国专利授权公告号为：CN104357387B所公开的《一种从脂肪组织中分离人脂肪干细胞的方法》所公开的“2001年，细胞生物学家通过脂肪抽吸术，在吸出的人体脂肪悬液中第一次分离得到了多向分化的干细胞，并发现它能分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、血管内皮、肝、胰、神经等细胞；这种从人脂肪组织中发现的具有分化潜能的成体干细胞，被称为人脂肪干细胞”。如中国专利公开号为：CN104611290A的文件《诱导脂肪干细胞分化为表皮细胞的方法》、中国专利公开号： CN104805051A的文件《诱导脂肪干细胞分化为成纤维细胞的方法》、中国专利公开号：CN106350483A的文件《诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化的培养方法》、如中国专利公开号：CN 103805566B的文件《人脂肪干细胞经三维培养后分化成神经样干细胞的方法》等内容可知，脂肪干细胞(ADSCs)本身具有多向分化潜能，在一定的条件下，能够被诱导分化为多种细胞，包括成骨细胞，软骨细胞，脂肪细胞，神经细胞和肝细胞等。而且脂肪干细胞(ADSCs)不受时间限制，可以从任意年龄段患者自体抽脂分离获取，避免了免疫排斥，取材也相对容易且不会形成肿瘤。脂肪干细胞(ADSCs)经过多年研究，已经可以被诱导分化为多种细胞，但通过小分子诱导人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞的技术却未见公开；因此，本专利将立足采用人源脂肪干细胞(hADSCs)，采用小分子而非基因导入方法诱导脂肪干细胞(ADSCs)分化为功能的成熟睾丸间质细胞LCs(ALCs)，为将来患者采用自体脂肪干细胞(ADSCs)分化的睾丸间质细胞(ALC)移植治疗雄性激素缺乏症提供科学依据。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种小分子诱导人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞的方法，该方法突破了现有技术中诱导人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞的技术空白；且诱导完全采用小分子，不依赖外源基因的导入，提高了未来用于临床应用的安全性。