[发明专利]抗亚精胺单克隆抗体杂交瘤细胞株4E4及其单克隆抗体和应用

说明书

本发明属于细胞免疫技术领域，具体公开了抗亚精胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株4E4及其单克隆抗体和应用。所述杂交瘤细胞株4E4于2018年3月2日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO:C201841。所述杂交瘤细胞株4E4分泌的抗亚精胺单克隆抗体4E4能够特异地识别亚精胺和精胺，通过阻断多胺的吸收和下调T3SS基因表达来保护A549细胞对抗绿脓杆菌感染。所述抗亚精胺单克隆抗体4E4能降低血清中亚精胺水平，减轻小鼠肺的损伤从而显著提高小鼠存活率，可用于制备治疗绿脓杆菌感染的药物或制剂，具有很好的推广应用前景。

技术领域

本发明涉及细胞免疫技术领域，具体地，涉及抗亚精胺单克隆抗体杂交瘤细胞株4E4及其单克隆抗体和应用。

背景技术

绿脓杆菌(P.aeruginosa)是一种重要细菌病原体，可引起囊性纤维化患者和免疫力弱的个体严重感染，这种细菌病原体的感染往往伴随高的死亡率。绿脓杆菌能引起上皮损伤，并逃避宿主先天免疫反应的作用，主要是由于它可以经过III型分泌系统(T3SS)直接将其表达的毒性效应蛋白转运到真核细胞中。许多研究已经证明，T3SS是绿脓杆菌的关键毒力决定因素，它在通过操纵真核宿主细胞急性感染应答方面起重要作用。

T3SS系统可以由哺乳动物宿主的多胺信号亚精胺(Spermidine)和精胺(Spermine)激活。亚精胺由真核和原核生物产生，是诱导T3SS基因表达起关键作用的信号。相关研究表明，由spuDEFGH编码的亚精胺转运基因缺失，能显著降低T3SS基因表达，且减弱绿脓杆菌对Hela细胞系的感染毒性。因此，制备能特异性识别亚精胺的单克隆抗体将有利于治疗由绿脓杆菌感染引起的一系列疾病。但是，现有技术中尚未有能分泌特异性识别亚精胺的单克隆抗体的杂交瘤细胞株的相关报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一株分泌抗亚精胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株4E4。

本发明的另一目的在于提供上述杂交瘤细胞株4E4分泌的抗亚精胺单克隆抗体4E4，能够特异地识别亚精胺和精胺，通过阻断多胺的吸收和下调T3SS基因表达来保护A549细胞对抗绿脓杆菌感染。

本发明的另一目的在于提供上述抗亚精胺单克隆抗体4E4在制备降低血清中亚精胺水平的制剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供上述抗亚精胺单克隆抗体4E4在制备抑制T3SS基因表达的制剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供上述抗亚精胺单克隆抗体4E4在制备含T3SS系统的革兰氏阴性致病菌的治疗药物或制剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供上述抗亚精胺单克隆抗体4E4在制备治疗绿脓杆菌感染的药物或制剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供上述抗亚精胺单克隆抗体4E4在制备检测亚精胺和/或精胺的制剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种治疗绿脓杆菌感染的药物或制剂。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

一株分泌抗亚精胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株4E4，所述杂交瘤细胞株4E4于2018年3月2日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:C201841，保藏地址为中国武汉。

上述杂交瘤细胞株的制备方法如下：先制备亚精胺载体蛋白藕合物HSA-亚精胺和OVA-亚精胺，用弗氏完全佐剂乳化的HSA-亚精胺藕合物皮下注射BALB/c小鼠，再用弗氏不完全佐剂乳化；最后一次加强免疫后取免疫鼠脾脏，悬浮脾脏组织成游离细胞后用常规技术与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行细胞融合，以产生杂交瘤细胞。用ELISA检测细胞上清液，经过多次有限稀释亚克隆筛选，最后获得稳定分泌、高效价、高特异性的抗亚精胺单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株4E4，然后进行保藏。