[发明专利]一种淡水水体沉积物中电子传递体系活性的测定方法

说明书

本发明提供一种淡水水体沉积物中电子传递体系活性的测定方法，利用由聚乙烯吡咯烷酮K‑30、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸镁、曲拉通按一定比例混合配置而成的缓冲溶液进行多次提取，以NADPH和NADH为电子供体，以INT为电子受体，无色的INT接收电子后变红，在490nm比色，测定过程采用三组(A(浊度空白)、B(对照空白)、C(样品测定))。本发明采用多次提取的方式，提取更充分；测定过程采用三组消除了提取液中缓冲溶液的影响，及基底溶液中磷酸盐缓冲溶液的影响；电子传递体系活性用每克干重沉积物表示，则不同采样点之间的电子传递体系活性更有可比性。

技术领域

本发明属于淡水水体沉积物中活性的测定技术领域，具体涉及一种淡水水体沉积物中电子传递体系活性的测定方法。

背景技术

沉积物的电子传递体系活性可反应微生物降解有机质的能力，同时从生物活性的高低又可衡量有机质的降解速率及对沉积物营养释放的影响。电子传递体系活性还被用于估计微生物的呼吸耗氧量、硝酸盐的还原与碳的氧化，因此，在研究淡水水体沉积物有机质分解速率及营养元素生物地球化学循环过程中具有重要意义。但国内研究只要集中在用ETS活性表征活性污泥微生物活性，对淡水水体沉积物中微生物ETS活性研究得比较少。

电子传递体系活性是通过测定微生物的电子传递速率来间接指示微生物的呼吸活性。现有的电子传递体系活性测定方法存在诸多不足，如缓冲液只是单纯的NaH₂PO₄溶液，且用缓冲液提取时，只提取一次，存在提取不充分的情况；现有方法多用新鲜沉积物重量计算电子传递体系活性，因不同沉积物含水率明显不同，如果用新鲜沉积物重量计算电子传递体系活性，则大大降低了不同采样点甚至不同水体沉积物电子传递体系活性的可比性；最后现有的方法是加入基质溶液(NADPH溶液和NADH溶液)，及INT溶液后，放入培养箱培养40min，再加入终止溶液阻断反应，因反应速率是随时间不断变化的，只是测一段时间的平均反应速率会导致结果不准确，且这个时间还相对较长(40min)，所以所测结果不能保证准确性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种淡水水体沉积物中电子传递体系活性的测定方法，以解决现有技术中存在的问题。

本发明采取的技术方案为：一种淡水水体沉积物中电子传递体系活性的测定方法，该方法包括以下步骤：

(1)试剂的配制：

A、磷酸盐缓冲液：称取35.8140g十二水合磷酸氢二钠，用蒸馏水溶解后定容至500ml，此为溶液(1)；称取15.6000g二水合磷酸二氢钠，用蒸馏水溶解后定容至500ml，此为溶液(2)；将473.5ml溶液(1)和26.5ml溶液(2)混合后即为磷酸盐缓冲液；

B、硫酸镁溶液：称取0.0370g硫酸镁，用蒸馏水溶解后定容至1000ml；

C、20％的曲拉通(Triton X-100)：移取1ml曲拉通(Triton X-100)至10ml离心管，并移取4ml蒸馏水与之混合得20％的曲拉通；

D、缓冲溶液(buffer)：称取0.3750g聚乙烯吡咯烷酮K-30(PVP)，并加入A中配制的125ml磷酸盐缓冲液、B中配制的125ml硫酸镁溶液和C中配制的2.5ml 20％的曲拉通(TritonX-100)，溶解并混合均匀成缓冲溶液；

E、基质溶液(substrate)：称取0.1430gNADH和0.0500gNADPH，融入54ml灭菌蒸馏水，并与A中配制的55ml磷酸盐缓冲液和C中配制的1ml 20％的曲拉通(Triton X-100)混匀成底物；

F、INT溶液：称取0.0560g 2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基氯化四唑(或碘硝基四唑紫，INT)溶于28ml灭菌蒸馏水中制得INT溶液；