[发明专利]消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2和标准品；所述试剂R1包括用于沉淀血清脂类的物质，所述用于沉淀血清脂类的物质包括聚乙烯醇硫酸钾,肝素-Mn²⁺,硫酸葡聚糖-Mg²⁺,硅钨酸和磷钼酸钠；所述试剂R2包括偶联抗体的胶乳颗粒；所述标准品是添加不同浓度胃蛋白酶原Ⅱ抗原的人血清基质缓冲液，用来与样本比较进行结果计算;

所述试剂R1为：Tris 12.1g/L，聚乙二醇6000 1.2g/L，氯化钠2.7g/L，聚乙烯醇硫酸钾6g/L，肝素-Mn²⁺5.4g/L，硫酸葡聚糖-Mg²⁺2.7g/L，硅钨酸0.1g/mL，磷钼酸钠1～1.2％，ProClin 3001mL/L，用17％盐酸溶液调pH为8.20±0.05；所述试剂R2包括R2缓冲液和1％偶联抗体的胶乳颗粒，其中所述R2缓冲液包括十二水合磷酸氢二钠4.5g/L，二水合磷酸二氢钠0.48g/L，氯化钠0.9g/L，牛血清白蛋白1.0g/L，Tween-20 1.5mL/L，ProClin 3001mL/L。

2.一种消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法，其特征在于，根据权利要求1所述的试剂R1和试剂R2的配方，分别配制所述试剂R1和所述试剂R2，其中所述试剂R2配制步骤包括，配制R2缓冲液和配制1％偶联抗体的胶乳颗粒。

3.如权利要求2所述的消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述配制偶联抗体的胶乳的具体步骤包括：(1)胶乳洗涤：用缓冲液稀释胶乳；(2)活化剂溶液配制及活化：配制NHS、EDC活化剂，用HEPES缓冲液分别溶解，在搅拌的过程中，分别滴加到胶乳溶液中，并充分搅拌；(3)淬灭及胶乳洗涤：加入淬灭剂到活化胶乳，离心，用各管活化缓冲液复溶，制备好的胶乳充分利用超声波分散；(4)连接：分散后的胶乳溶液中，添加抗人PGⅡ抗体-1和抗人PGⅡ抗体-2，并充分混合；(5)封闭：加入封闭液混合溶液后反应，胶乳洗涤离心后，用R2缓冲液复溶胶乳即得到所述试剂R2。

4.如权利要求3所述的消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胶乳洗涤中用50mM HEPES pH 7.40缓冲液稀释胶乳，胶乳为230nm的粒径。

5.如权利要求3所述的消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法，其特征在于，配制NHS、EDC活化剂中用50mM HEPES pH 7.40缓冲液分别溶解成20mg/mL、40mg/mL，各取400μL在搅拌的过程中，滴加到胶乳溶液中，并充分搅拌，37℃，200转/min，反应30min。

6.如权利要求3所述的消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法，其特征在于，淬灭及胶乳洗涤时加入的淬灭剂为3-巯基-1，2-丙二醇，所述淬灭剂用纯化水1：10稀释后，加入400μL到活化胶乳，37℃200转/分钟淬灭10min,17900RPM离心45min，用各管活化缓冲液复溶，制备好的胶乳充分利用超声波分散。

7.如权利要求3所述的消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法，其特征在于：胶乳连接抗体时，分散后的胶乳溶液中，添加0.8mg抗人PGⅡ抗体-1和抗人PGⅡ抗体-2，并充分混合，37℃，转速为200转/分钟，反应2h。

8.如权利要求3所述的消除血清脂类干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法，其特征在于：封闭时，加入2mL封闭液1混合溶液后37℃200转/min反应30min，再加入2mL封闭液2，37℃200转/分钟反应30min，胶乳洗涤、用R2缓冲液复溶胶乳后定容，所述封闭液1包括三乙醇胺和甘氨酸，所述封闭液2包括牛血清白蛋白。