[发明专利]一种提取骨髓间充质干细胞的方法及应用在审
| 申请号： | 201810283166.7 | 申请日： | 2018-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN108531450A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 蓝蔚仁;孙超;左睿;李海音;蒋长青;潘赛;李长青 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 重庆志合专利事务所(普通合伙) 50210 | 代理人： | 胡荣珲 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 干细胞 骨髓间充质干细胞 骨髓腔 内容物 单细胞悬液 冲洗液 股骨 胫骨 细胞培养 大鼠骨髓间充质干细胞 细胞生物学研究 生物学研究 污染几率 细胞提取 重要意义 前处理 团块状 吹打 接板 可用 团块 冲洗 应用 细胞 | ||
1.一种提取骨髓间充质干细胞的方法，其特征在于，包括：
步骤(1)前处理，得到股骨和胫骨；
步骤(2)冲洗股骨和胫骨，提取骨髓腔内容物，得到包含团块状骨髓腔内容物的冲洗液，收集冲洗液中的干细胞；
步骤(3)吹打剩余的骨髓腔团块内容物，得到单细胞悬液，收集单细胞悬液中的干细胞；
步骤(4)将步骤(2)和步骤(3)得到的干细胞细胞接板和细胞培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述前处理包括步骤(11)：分离股骨和胫骨，将股骨和胫骨上的组织剥离。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，采用含有10％胎牛血清的DMEM培养基，进行所述冲洗。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述冲洗采用1mL注射器4.5针头进行。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述收集冲洗液中的干细胞为：1200rpm离心5分钟，弃上清。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述吹打剩余的骨髓腔团块内容物包括：先用6号针头吹打，然后用4.5号针头吹打。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞接板包括：将步骤(2)得到的细胞接种在六孔板的一个孔中，将步骤(3)得到的细胞接种在其余五孔中。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述前处理还包括步骤(12)：将组织剥离后的股骨和胫骨泡在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中。
9.权利要求1-8任意一项所述的方法用于提取大鼠骨髓间充质干细胞。
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