[发明专利]一种分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法

说明书

本发明涉及一种分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，包括如下步骤：(1)上样：将玻璃酸钠原料溶解于水，得到样品溶液；将样品溶液上样至Q‑Sepharose fast flow阴离子交换柱中；(2)梯度洗脱：依次用0.4M、0.6M和1.0M的NaCl水溶液进行梯度洗脱，收集0.4M NaCl水溶液的洗脱液，为含有玻璃酸钠的溶液；收集1.0M NaCl水溶液的洗脱液，为含有杂合硫酸软骨素的溶液。本发明实现了一次性去除多个杂合硫酸软骨素杂质并与玻璃酸钠有效分离的目的，所分离出的杂合硫酸软骨素纯度达99.5wt％以上，同时玻璃酸钠得到高效纯化，纯度达99.5wt％以上。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法。

背景技术

玻璃酸钠是一种高分子多糖，用于外科关节病、组织修复、眼科手术、辅助诊断等方面。其生产工艺主要分为两大类，以动物组织为原料的提取法和细菌发酵法。在鸡冠提取法(动物组织)生产玻璃酸钠的工艺研究过程中，通过对玻璃酸钠纯度的测定，可调控最佳的工艺条件，为工艺改进提供更准确的数据支持，从而保证下游成品的品质。

CN102516411A公开了一种玻璃酸钠发酵液的前处理方法，硅藻土吸附后，通过物理方法的过滤和微滤来达到玻璃酸钠发酵液的除菌目的，其成本低、安全、有效；利用本方法处理的玻璃酸钠发酵液，可基本去除发酵液中菌体，有效减少了核酸和蛋白等杂质的含量，特别适合医药级玻璃酸钠的工业化生产，并且由该方法处理过的玻璃酸钠发酵液的透光率比较高，但是该方法没有提到分离出玻璃酸钠中的杂合硫酸软骨素，而且也得不到纯度较高的杂合硫酸软骨素。

CN206392032U公开了一种交联透明质酸钠凝胶的纯化装置，在釜体中设置离子交换柱处理结构，其中包括强酸型阳离子交换柱和强碱型阴离子交换柱，主要是利用离子交换柱去除蛋白这种两性杂质，蛋白质变性，无法得到可以再利用的杂合硫酸软骨素。

现有技术中注射液和眼角膜保存液中大多同时含有玻璃酸钠和杂合硫酸软骨素这两种组分。一般认为玻璃酸钠中含有的杂合硫酸软骨素有益处，例如硫酸软骨素对角膜胶原纤维具有保护作用，能促进基质中纤维的增长，增强通透性，改善血液循环，加速新陈代谢，促进渗透液的吸收及炎症的消除，但是其在某些临床应用领域产生的不良反应，有些病人有发痒、红肿等过敏现象，这些不良反应被忽略了。普通的技术人员没有动机去除该杂质。且杂合硫酸软骨素非单一组分构成，现有技术上没有报道过通过一个步骤去除多个杂质并与玻璃酸钠有效分离的方法。

发明内容

鉴于现有技术中存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种分离玻璃酸钠中杂质的方法，从玻璃酸钠原料中高效分离出高纯度的杂合硫酸软骨素和高纯度的玻璃酸钠。

为达此目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，包括如下步骤：

(1)上样：将玻璃酸钠原料溶解于水，得到样品溶液；将样品溶液上样至Q-Sepharose fast flow阴离子交换柱中；

(2)梯度洗脱：依次用0.4M、0.6M和1.0M的NaCl水溶液进行梯度洗脱，收集0.4MNaCl水溶液的洗脱液，为含有玻璃酸钠的溶液；收集1.0M NaCl水溶液的洗脱液，为含有杂合硫酸软骨素的溶液。

本发明所述的“包括”，意指其除所述步骤外，还可以包括其他步骤，这些其他步骤赋予所述方法不同的作用。除此之外，本发明所述的“包括”，还可以替换为封闭式的“为”。