[发明专利]一种分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法

权利要求书

1.一种分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)上样：将玻璃酸钠原料溶解于水，得到样品溶液；将样品溶液上样至Q-Sepharosefast flow阴离子交换柱中；

(2)梯度洗脱：依次用0.4M、0.6M和1.0M的NaCl水溶液进行梯度洗脱，收集0.4M NaCl水溶液的洗脱液，为含有玻璃酸钠的溶液；收集1.0M NaCl水溶液的洗脱液，为含有杂合硫酸软骨素的溶液。

2.如权利要求1所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，步骤(1)所述玻璃酸钠原料包括生物提取法生产的玻璃酸钠原料；

优选地，步骤(1)所述样品溶液中玻璃酸钠原料的浓度为0.3～0.8g/L，优选0.4～0.6g/L。

3.如权利要求1或2所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，步骤(1)所述Q-Sepharose fast flow阴离子交换柱的高径比为(10～20):1，优选(10～15):1。

4.如权利要求1～3任一项所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，步骤(1)所述上样时的流速为5.0～10.0mL/min，优选7.5～8.5mL/min；

优选地，所述步骤(1)中上样体积为0.1～0.3倍的柱体积。

5.如权利要求1～4任一项所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述步骤(1)之前还包括：活化Q-Sepharose fast flow阴离子交换柱；

优选地，所述活化具体包括：依次用超纯水、NaCl水溶液和超纯水，过所述Q-Sepharosefast flow阴离子交换柱进行洗涤；

优选地，所述活化时用的NaCl水溶液的浓度为0.2～0.6M。

6.如权利要求1～5任一项所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述步骤(2)所述洗脱体积为10～13倍的柱体积；

优选地，步骤(2)所述梯度洗脱时的流速为5.0～10.0mL/min，优选7.5～8.5mL/min。

7.如权利要求1～6任一项所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述步骤(2)中依次用0M、0.4M、0.6M和1.0M的NaCl水溶液进行梯度洗脱。

8.如权利要求1～7任一项所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，步骤(2)还包括：收集0.6M NaCl水溶液的洗脱液，返回步骤(1)进行再次分离。

9.如权利要求1～8任一项所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤(3)：将步骤(2)所得含有玻璃酸钠的溶液进行纯化，得到玻璃酸钠；

和/或，将步骤(2)所得含有杂合硫酸软骨素的溶液进行纯化，得到硫酸软骨素。

10.如权利要求1～9任一项所述的分离玻璃酸钠与杂合硫酸软骨素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)活化：依次用超纯水、0.2～0.6M的NaCl水溶液和超纯水，过所述Q-Sepharose fastflow阴离子交换柱进行洗涤；

上样：将浓度为0.3～0.8g/L的样品溶液以5.0～10.0mL/min的流速上样至Q-Sepharose fast flow阴离子交换柱中，上样体积为0.1～0.3倍的柱体积；

(2)梯度洗脱：用0M、0.4M、0.6M和1.0M的NaCl水溶液进行梯度洗脱，流速为5.0～10.0mL/min，洗脱体积为10～13倍的柱体积，收集0.4M NaCl水溶液的洗脱液，为含有玻璃酸钠的溶液；收集1.0M NaCl水溶液的洗脱液，为含有杂合硫酸软骨素的溶液；收集0.6MNaCl水溶液的洗脱液，返回步骤(1)进行再次分离。

(3)纯化：将步骤(2)所得含有玻璃酸钠的溶液进行纯化，得到玻璃酸钠；和/或，将步骤(2)所得含有杂合硫酸软骨素的溶液进行纯化，得到硫酸软骨素。