[发明专利]一种快速诊断以色列急性麻痹病毒试纸及其应用

说明书

本发明公开了一种蜜蜂急性麻痹病毒抗体胶体金快速检测试剂条，包括支撑层，以及在所述支撑层上依次设置的加样垫、金标抗体释放垫、检测层和吸收层，所述金标抗体释放垫包埋有胶体金标记的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白；所述检测层上设置有检测带和质控带，所述检测带固定有以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白，所述质控带固定有以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白抗体。本发明的试纸条特异性强，极大的降低了出现假阳性的概率，保证了试纸条特异性和灵敏度；安全性高，避免检测过程中复杂的病毒处理操作；操作简便快捷，本发明不需要专业的技术人员进行操作和专业仪器的辅助检测，检测结果直观易判定并且检测时间只需20min极为迅速。

技术领域

本发明属于兽医生物技术领域，涉及一种快速检测抗体技术，尤其涉及蜜蜂以色列急性麻痹病毒抗体的检测试纸条，同时还涉及该试纸条的制备方法和应用方法。

背景技术

以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus)属于picornavirus目下的Dicistroviridae科的病毒成员。其中以色列急性麻痹病毒与蜜蜂多种疾病相关，主要引起蜜蜂爬蜂、颤抖、迷巢及失去飞翔能力。感染以色列急性麻痹病毒的蜜蜂将无法正常采集，导致蜜蜂免疫力下降，在遇到其它压力的共同作用下将引起蜂群大量损失甚至整群崩溃。因此，以色列急性麻痹病毒是一种严重威胁蜜蜂产业的病害。

自2007年美国最先报道以色列急性麻痹病毒是引起蜜蜂蜂群崩溃症的(CCD)的最主要原因以来，世界各地均报道了以色列急性麻痹病毒的感染与危害。同时，我们国家也报道了多个以色列急性麻痹病毒的毒株，并且在越冬蜂中的危害更为严重，直接影响第二年蜂群的发展。因此，开发建立一种可以对蜜蜂蜂群的以色列急性麻痹病毒抗体检测快速有效的方法是十分必要的。并且目前没有任何关于蜜蜂病毒的抗体检测法，已有的检测方法主要是PCR及环介导温等方法，这些方法存在一些较难克服的缺点，比如：PCR法需要若干个试剂、且检测步骤较为繁琐，检测所需的时间较长，检测过程中还需其它设备与仪器，并且对于在实地情况下的蜂农来说，对技术要求也是一个重要的难题，整体所需的花费也较高。因此迫切需要建立一种省时省力又可以迅速普及的检测方法。

免疫胶体金技术是20世纪80年代继荧光标记、放射性同位素标记和酶标记三大标记技术后发展起来的固相标记免疫测定技术，目前已广泛应用于临床诊断,尤其是在医学、兽医学临床检验中已广泛应用，具有费用低、灵敏度高、速度快、使用便捷、操作简单和易于普及等特点。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种以色列急性麻痹病毒(IAPV)抗体胶体金快速检测试纸条。

本发明提供的检测纸条，其包括支撑层，以及在所述支撑层上依次设置的加样垫、金标蛋白释放垫、检测层和吸收层，所述金标蛋白释放垫包埋有胶体金标记的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白；所述检测层上设置有检测带和质控带，所述检测带固定有以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白，所述质控带固定有蜜蜂以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白抗体。所述以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白序列如序列表中序列1所示。

所述质控带固定有以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白多克隆抗体或者以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白单克隆抗体。

所述以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白是将序列表中序列1所示的核苷酸片段插入到表达载体中表达后纯化得到所述以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白；所述表达载体优选为pEASY载体。