[发明专利]一种卵巢组织的冻存与复苏方法

说明书

本发明公开了一种卵巢组织的冻存与复苏方法，包括冻存方法和复苏方法，所述的冻存方法包括以下步骤：(1)预处理：将卵巢组织置于转移液中，去除髓质，保留皮质并切为组织片；(2)渗透平衡：将组织片转移到盛有冻存保护液的样本盒内，置于冰中平衡；(3)冻存：冻存管中加入一定量的冻存保护液，组织块放入冻存管中，然后逐步降温进行液氮冻存。本发明的逐步降温的液氮冻存方法能够减小对卵巢组织的损伤，同时冻存保护液和复苏保护剂配合使用，能够快速高效的冻存卵巢组织，并且能够提高复苏后的卵巢组织活率。

技术领域

本发明属于卵巢组织冷冻保存领域，具体地说，涉及一种卵巢组织的冻存与复苏方法，同时涉及冻存保护液和复苏液。

背景技术

中国每年新发癌症患者430万左右，而癌症患者五年存活率可以高达80-90％以上，70％以上的存活者有迫切的生育需求，但放化疗在挽救癌症患者生命的同时，却导致了70％-100％卵巢功能的损害，使其丧失生育能力，极大地影响患者的身心健康和家庭幸福；由于卵巢功能的极早衰退，导致患者各种慢性病如心血管疾病、糖尿病、骨质疏松、早老性痴呆及早死率明显增高，增加国家巨大的医疗负担。因此，在放化疗前对卵巢功能进行保护非常重要。

目前对生殖力保护的方法有几种：卵子冻存、胚胎冻存和卵巢组织冻存。胚胎冻存为试管婴儿的常规技术，卵子冻存，目前中国限于不孕不育IVF患者取精失败或卵巢过度刺激放弃周期的患者，不适用于青春期前女孩及大多急需放化疗的癌症患者，有很大的局限性。

而卵巢组织冻存与再移植技术是目前国际上最新的、最有前景的生殖力保护方法。在放化疗前取部分卵巢组织经特殊处理冻存起来，待其临床痊愈后移植回体内，不仅可以恢复患者的生育能力，还可以恢复其卵巢的内分泌功能，也是抗衰老的热点话题。在欧美发达国家，卵巢组织冻存与再移植技术已作为常规生殖力保护技术应用了十余年，而在我国尚无活产报道。

为了保证卵巢组织再移植回所有者体内后的活性，卵巢组织的冻存和复苏的试剂和方法至关重要。卵巢组织的冻存和复苏液和方法直接影响再移植后的活性，因此，需要提供一种能够适宜卵巢组织冻存、复苏，提高卵巢组织再移植活性的试剂及其方法。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种卵巢组织的冻存与复苏方法。本发明的冻存与复苏方法能够快速高效的冻存卵巢组织，减小对卵巢组织的损伤；同时配合相应的冻存保护液和复苏保护液，能够进一步提高复苏后的卵巢组织的活性。

为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：

本发明提供一种卵巢组织的冻存与复苏方法，其中，包括冻存方法，所述的冻存方法包括以下步骤：

(1)预处理：将卵巢组织置于转移液中，去除髓质，保留皮质并切为组织片；

(2)渗透平衡：将组织片转移到盛有冻存保护液的样本盒内，置于冰中平衡；

(3)冻存：冻存管中加入一定量的冻存保护液，组织块放入冻存管中，然后逐步降温进行液氮冻存。

进一步的方案，冻存方法中，所述的逐步降温进行液氮冻存的过程包括：

(1)2℃平衡，维持15min；(2)以6℃/min的速度降至-2℃；(3)以4℃/min的速度降至-4℃；(4)以2℃/min的速度降至-7.5℃；(5)以0.5℃/min的速度降至-8℃；(6)以0.5℃/min的速度降至-11.5℃；(7)以0.1℃/min的速度降至-13℃；(8)以0.3℃/min的速度降至-42℃；(9)以50℃/min的速度降至-100℃。