[发明专利]一种近红外Ag2

说明书

本发明提出一种近红外Ag₂S纳米组装体探针，其包括多个基于HCR反应组装的单体M1和单体M2；所述单体M1由DNA‑Ag₂S纳米点和如SEQ ID NO.2所示的核酸序列H1组装而成；其中，所述DNA序列如SEQ ID NO.1所示；所述单体M2由如SEQ ID NO.3所示的适配体和如SEQ ID NO.4所示的核酸序列H2组装而成。本发明还提供了近红外Ag₂S纳米组装体探针的制备方法，其具有原料易得、条件温和、常温反应无需加热、产品质量稳定等特点。本发明还提出所述近红外Ag₂S纳米组装体探针用于检测循环肿瘤细胞的方法及应用。本发明应用于检测循环肿瘤细胞，具有高特异性识别能力及高灵敏度，可用于全血中靶细胞的进一步分析。本发明在癌症临床诊断、术后预防和治疗等方面具有广泛应用前景。

技术领域

本发明属于生物分析领域，具体涉及了一种近红外Ag₂S纳米组装体探针及其制备方法以及在检测循环肿瘤细胞中的应用。

背景技术

循环肿瘤细胞(Circulatingtumorcells，CTCs)是存在于外周血中肿瘤细胞的统称，其在血液中的表达水平与癌症患者的预后和生存息息相关。CTCs的检测对于转移灶早期的诊断，癌症预后，治疗监测和转移诊断具有重要意义。但是CTCs的检测和分析并不容易，因为CTCs 与其他血细胞之间没有明确的区别。此外，外周血中的CTCs数量很少，通常在10⁹个白细胞中只有一个。因此，从全血中高度有效分离及检测CTCs是一个挑战性的课题。

目前已有许多的技术方法用于CTCs的富集和检测。例如，依赖于癌细胞和正常细胞之间大小差异的微流控技术，这种技术虽然会增加癌症患者中CTCs回收的效率。然而，其是通过微阵列和微过滤器来实现的，技术的复杂性和破坏性释放限制了其应用。最近，还有一些利用不同信号传导模式的分析方法被用来分析CTCs，包括电感耦合等离子体质谱法，拉曼成像法，比色法，荧光法等。其中具备响应快，灵敏度高，无破坏性和实时监测的荧光检测方法引起了人们的极大关注。目前研究中，许多有机荧光染料和荧光纳米材料(CdSe/ZnSQDs，CdTe/CdS QDs和AuNCs)具有可见光发射(650nm)，已被用于检测CTCs。众所周知，可见光在复杂基质中会引起背景信号以及散射光干扰，而近红外荧光(NIR)发射的材料在生物分析领域具有较高的穿透深度和低的散射。Wang课题组设计合成了NIR荧光钕标记物用于CTCs的定量分析，但是该探针涉及到复杂的有机合成。总之，使用NIR探针用于全血中CTCs的高效捕获和检测体系还比较少。因此，开发NIR荧光探针用于高灵敏捕获和检测CTCs仍然是高度需求的和具有挑战性的。

发明内容

本发明提出了一种基于杂交链式反应(HCR)核酸放大技术(杂交链式反应技术，Hybridizationchainreaction，HCR)组装的近红外Ag₂S纳米组装体(纳米点)，作为探针应用于灵敏分析CTCs。本发明具有稳定、灵敏度高以及选择性好等优点，有利于实现癌症的早期诊断。

本发明提出了一种近红外Ag₂S纳米组装体探针，其包括基于HCR反应组装的单体M1 和单体M2；所述单体M1包含DNA-Ag₂S纳米点和如SEQ ID NO.2所示的核酸序列H1，其中，所述DNA序列如SEQ ID NO.1所示；所述单体M2包含如SEQ ID NO.3所示的适配体和如SEQID NO.4所示的核酸序列H2。

其中，所述近红外Ag₂S纳米组装体探针含有多个适配体及多个Ag₂S纳米点。一个近红外Ag₂S纳米组装体探针包括基于HCR反应组装的多个单体M1和多个单体M2。单体M1 由一个DNA-Ag₂S纳米点和如SEQ ID NO.2所示的发夹结构核酸序列H1组装而成，其中，所述DNA序列如SEQ ID NO.1所示。单体M2由如SEQ ID NO.3所示的适配体和如SEQ ID NO.4所示的核酸序列H2组装而成。