[发明专利]（3R;5S）-6-氯-3;5;-二羟基己酸叔丁酯的制备方法

说明书

本发明涉及一种(3R,5S)‑6‑ 氯 ‑3,5‑ 二羟基己酸叔丁酯的制备方法，本发明使用开菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefir)作为全细胞生物催化剂，从(S)‑CHOH开始不对称合成，能够实现反应的一步合成，并在发酵液不浓缩的情况下获得较高的转化率。

技术领域

本发明属于制药工业生物技术领域，具体涉及一种(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的制备方法。

背景技术

具有光学活性的β，δ-二羟基酯已经在天然产品、多羟基化合物以及手性药物的合成中得到了广泛的运用。(3R,5S)-6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯是一种重要的药物中间体，可用于合成HMG-CoA还原酶的抑制剂(他汀类药物)，这类药物可以有效的防止动脉粥样硬化和冠心病的发生。

目前合成(3R,5S)-6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯的方法主要有化学方法和生物方法。WolbergM等将(S)-6-氯-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称加氢还原成(3R,5S)-6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯需要低温催化合成，对反应器的要求较高，而且催化剂的价格昂贵，成本较高，因此运用生物法进行催化合成具有良好的前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种(3R,5S)-6-氯-3,5,-二羟基己酸叔丁酯的制备方法，使用开菲尔乳杆菌(Lactobacilluskefir)作为全细胞生物催化剂，从(S)-CHOH开始进行不对称合成。

为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

一种(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的制备方法，包括如下步骤：

(1)发酵培养L.kefirATCC 35411全细胞菌株；

(2)在发酵液中添加底物(S)-CHOH、葡萄糖和MgCl₂，进行催化转化；

(3)产物分离提取。

本发明的方法，所述步骤(1)中，富集培养的培养基成分为酵母粉25g/L，葡萄糖20g/L，无水乙酸钠5g/L，三水合磷酸氢二钾2g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，七水合硫酸镁0.2g/L,一水合硫酸镁0.05g/L，吐温801g/L；发酵培养基成分为酵母粉8g/L，葡萄糖20g/L，无水乙酸钠5g/L，三水合磷酸氢二钾2g/L，七水合硫酸镁0.2g/L，一水合硫酸锰0.05g/L，吐温801g/L，发酵pH6.0，温度30℃。

所述步骤(2)中，在发酵液中添加氯化镁，葡萄糖，(S)-CHOH底物进行催化转化；转化过程用氢氧化钠调节pH至6.0～7.0，27℃，转化过程中通入氮气，通气速度为0.1～0.2VVM以维持微正压。

或将发酵液浓缩至OD_660＝100，后在发酵液中添加氯化镁，葡萄糖，(S)-CHOH底物进行催化转化；转化过程用NaOH调节pH至6.0～7.0，27℃，转化过程中通入氮气，通气速度为0.1～0.2VVM以维持微正压。

所述步骤(3)中，取出转化液，加入1:1乙酸乙酯，混匀，8000rpm离心10min分离菌体细胞，取上清用乙酸乙酯：水＝1:1萃取三次，取出产物(3R,5S)-6-氯-3,5,-二羟基己酸叔丁酯后，去除水层，产物留在乙酸乙酯层，加入30g/L无水硫酸钠干燥1-2h，干燥后将溶剂进行旋蒸，45℃，压力从大气压降至150mPa，直至将溶剂旋干，旋蒸后将产物放入真空干燥箱进一步干燥，获取所需产物。

本发明的方法使用L.kefirATCC 35411作为全细胞生物催化剂，从(S)-CHOH开始进行不对称合成，反应产物转化率高，且在发酵液不浓缩的情况下可获取较高的转化率。

附图说明

图1为本发明技术路线图；