[发明专利]一种金纳米棒金纳米簇复合物快速检测试剂盒的制备方法

说明书

本发明公开了一种金纳米棒金纳米簇复合物快速检测试剂盒的制备方法。将准备好的金纳米棒溶液与11‑巯基十一烷酸作用；再离心分散后加入1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺活化；将活化好的金纳米棒溶液与谷胱甘肽还原法制备的金纳米簇溶液作用，再离心分散；将上一步所得金纳米棒金纳米簇复合纳米材料与前列腺癌DNA适配体相连接；在溶液中分别加入不同浓度的前列腺癌特异性抗原反应；并均加入显色剂和双氧水显色，将溶液体系环境调节至酸性，置于氙灯光照条件下反应，PSA浓度的不同，显色剂呈现的颜色也不一样，根据显色剂在波长650nm处的吸光度值与PSA浓度的关系，能计算得到待测样品中PSA的含量。

技术领域

本发明属于化学生物传感以及生物检测技术领域，具体涉及一种基于局域表面等离子体共振的金纳米棒金纳米簇复合纳米材料快速检测试剂盒的制备方法及其应用。

背景技术

前列腺癌特异性抗原(PSA)，正常人体水平是0.5-2ng/mL，早期患者为4-10ng/mL。前列腺癌过去在我国发生率较低，但随着人口老龄化和生活方式的改变，我国前列腺癌的发病率急剧上升，已经跃居男性恶性肿瘤的第6位，成为泌尿外科中发病率最高的肿瘤，在癌症初期，肿瘤标志物的血清浓度通常很低以至于很难检测到。因此，PSA含量的灵敏度和准确性检测具有相当重要的意义，急需构建一种精确、灵敏的分析方法来辅助肿瘤的早期诊断、监控病情的进展及临床治疗。

纳米生物技术是用于研究生命现象的纳米技术，是纳米技术和生物技术的结合。实现对纳米颗粒的尺寸大小、粒度分布、形状、表面修饰的控制，以及它们光电性质在化学中的应用，是纳米生物技术研究的关键。纳米金粒子具有较好的生物兼容性，一般生物大分子如酶以及其它蛋白质分子，固定在纳米金粒子上后可保留较好的生物活性，同时，纳米金具有特殊的氧化-还原能力，与普通金不同的强烈的表面等离子体共振光谱带等独特的光学特性。因此，在分子识别、生物分析化学中具有重要而广泛的应用价值。

金纳米棒具有独特的表面等离子体共振(SPR)特性，同时具有良好的稳定性和低的生物毒性。颜色的可调以及在催化、信息存储、生物医学等方面的广泛应用引起了业界的关注。

我们的研究表明通过金纳米棒局域表面等离子体共振(LSPR)诱导纳米复合物模拟酶性质能实现可视化快速检测。在氙灯光照条件下，金纳米棒表面自由电子与光子相互作用可产生沿金属表面传播的电子疏密波，当这些表面等离子体自由振荡频率与入射光频率一致时，会产生共振，从而可以加快金纳米棒复合纳米材料光催化显色。基于此，我们建立一种基于金纳米棒局域表面等离子体共振诱导金纳米棒金纳米簇复合纳米材料催化分解双氧水来检测肿瘤标志物的新方法，既可利用颜色变化对待测物进行可视化半定量检测，又可以通过吸光度的大小对待测物的准确含量进行定量检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种现象明显、操作简便、灵敏度高、准确有效的金纳米棒金纳米簇复合物快速检测试剂盒的制备方法。

本发明的金纳米棒金纳米簇复合物快速检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)首先制备好金纳米棒溶液，将金纳米棒溶液在离心机上以10000rpm离心10分钟，去除上清液，再用二次蒸馏水进行分散后备用；

(2)依据金纳米棒上的金与巯基化合物可形成金硫化学键，将离心好的金纳米棒溶液与11-巯基十一烷酸(MUA)作用12小时；

(3)将步骤(2)所得溶液在离心机上以6000rpm的转速离心15分钟，去除上清液后，再用二次蒸馏水进行分散，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化15分钟；

(4)将步骤(3)活化好的金纳米棒溶液与谷胱甘肽还原法制备的金纳米簇溶液作用30分钟，再以6000rpm转速离心15分钟，然后用二次蒸馏水进行分散，即可得到金纳米棒金纳米簇复合纳米材料；