[发明专利]一种对柑橘砂皮病菌有抑制作用的细菌及其筛选方法

说明书

本发明公开了一株能安全、无毒、有效的防治柑橘砂皮病（Diaporthe medusaea）的拮抗细菌短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）Y2菌株及其应用与筛选方法。短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）Y2菌株为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.14420。同时，该菌对柑橘炭疽菌、辣椒疫霉菌、草莓灰霉菌、水稻纹枯菌也有一定的抑制作用。目前国内还很少有柑橘砂皮病拮抗菌的报道，尤其是没有报道短小芽孢杆菌对柑橘砂皮病菌的抑制作用。因此，该拮抗菌株具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种对柑橘砂皮病菌有抑制作用的新菌株及其筛选方法。

背景技术

柑橘砂皮病（Diaporthe medusaea）是一种真菌性病害，也被称为黑点病，属于柑橘树脂病的一种。柑橘砂皮病的病原菌的有性态为柑橘座间菌(Diaporthe citri)，孢子形态为椭圆形或纺锤形，无色，双胞。无性态为柑橘拟茎点霉菌(Phomopsis citri)，其孢子分为α与β两种。α型孢子为纺锤形，无色，正直，常具2个油球（一端一个），有时油球更多，单胞。β型孢子为线形，无色，正直或者钩状，无油球，单胞。柑橘砂皮病虽然不会直接导致产量损失，但它严重影响了柑橘的外观品质，从而降低了柑橘的经济效益。

柑橘砂皮病的病原菌是一种弱寄生菌，病原菌容易侵入生长衰弱或受伤的柑橘树为害。因此，柑橘树遭受冻害造成的冻伤和其他伤口，是本病发生流行的首要条件。如上年低温使树干冻伤，往往次年温湿度适合时病害就可能大量发生。此外，多雨季节也常常造成砂皮病（树脂病）大量发生，主要为害果实、叶片和茎。柑橘砂皮病通常表现为柑橘的叶片和果实上出现红褐至黑色的硬质小黑点，密度疏密不一，就像粘了砂子一样，故称“柑橘砂皮病”。正因为如此，使得柑橘外观受到严重影响，柑橘的价格大打折扣，从而让广大果农遭受重大的经济损失。柑橘砂皮病的病原菌通过菌丝、分生孢子器和分生孢子在病树组织内越冬，来年春季的时候产生大量的分生孢子在枯枝上，可以通过昆虫和雨水进行传播，病原菌可以从伤口处侵入。分生孢子器全年产生分生孢子，在降雨充沛、低温潮湿的情况下， 产生的孢子数量最多，因此在第二年的春季环境的条件十分适宜该病原菌的传播与生长。有人指出，这些黑点的出现，是柑橘作为寄主本身做出防卫反应的产物。也有研究指出，柑橘砂皮的发病条件也与柑橘属的种质有一定关系。

目前来看，化学药剂是防治柑橘砂皮病的主要方法。但是长期单一使用某一化学药剂，容易产生抗药性，影响防治效果。同时，化学药剂对环境影响大以及对人体健康的潜在危害。因此，筛选对柑橘砂皮病菌有抑制作用的微生物是防治柑橘砂皮病的最佳途径。

发明内容

针对上述问题，本发明人从湖南省长沙市芙蓉区的浏阳河边采集土壤样品，利用NB培养基通过稀释平板法获得细菌的单菌落，再采用平板对峙法筛选对柑橘砂皮病菌有抑制作用的细菌。筛选到的短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）对人畜无致病性，能安全地用于柑橘砂皮病的生物防治。同时，该菌对柑橘炭疽菌、辣椒疫霉菌、草莓灰霉菌、水稻纹枯菌也有一定的抑制作用。

本发明提供的技术方案是：一种对柑橘砂皮病菌有抑制作用的细菌，其是保藏号为CGMCC No. 14420的短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）Y2菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

该细菌（短小芽孢杆菌，Bacillus pumilus） Y2菌株已于2017年 7月 13 日为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC所保藏（保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），其保藏号为CGMCC No. 14420，经检测存活。