[发明专利]硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法

说明书

本发明属于化学检测领域，具体涉及硫酸新霉素的组分及有关物质的HPLC检测方法，包括（1）色谱条件与系统适用性试验（2）溶液制备（3）测定等步骤。本发明提供的硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，该方法操作简单，分离度好，能够检出新霉素B和C两个较大的组分及较多的有关物质，检测效率高，具有良好的专属性、精密度和准确度，与现有技术相比能够检出更多的杂质，能更有效的对硫酸新霉素中的组分及有关物质进行控制，具有很强的实用性。

技术领域

本发明属于化学检测领域，具体涉及硫酸新霉素的组分及有关物质的HPLC检测方法。

背景技术

硫酸新霉素（Neomycin sulfate）是首个被发现的氨基糖苷类抗生素，它是1949年Waksman等从新霉素链霉菌代谢产物中分离得到的混合物，其抗菌谱广，对葡萄球菌属、棒状杆菌属有良好的抑菌作用，对大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属等肠杆菌科细菌亦有良好作用。硫酸新霉素的主要成分为新霉素B和新霉素C，新霉素A（新霉胺）是新霉素B、C的降解产物之一。由于硫酸新霉素没有紫外吸收，目前应用的检测方法主要有微生物检定法（效价法）、柱前衍生化法、HPLC-ELSD法等，上述这些方法均只测定了硫酸新霉素的含量，没有对其组分B和C及有关物质进行测定，中国药典2015年版二部采用薄层色谱法控制硫酸新霉素中新霉胺的含量，操作较为繁琐，灵敏度欠佳，专属性不强，且对其他有关物质没有控制。 因此，寻求一种能够有效分离且尽可能多的检出硫酸新霉素中有关物质的方法，对于硫酸新霉素的质量控制具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的不足而提供的一种硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，该方法操作简单分离度较好，检出的有关物质多，检测效率高，专属性强，检验方法较稳定，能有效的控制硫酸新霉素的质量。

为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，包括以下步骤：

（1）色谱条件与系统适用性试验：

用亲水性十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：Waters Xselect HSS T3柱，4.6×250mm，5μm或等效柱，流动相：0.15mol/L的三氟乙酸溶液，流速：1ml/min，进样量：10μl，柱温：30℃，检测器雾化温度：45℃，新霉素C相对于新霉素B的保留时间为0.85～0.95（约为0.9），新霉素C与主峰新霉素B之间的分离度不低于3.0；

（2）溶液制备：

①供试品溶液制备：取本品适量，加水溶解并稀释成浓度为1mg/ml的溶液，摇匀，作为供试品溶液；

②自身对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置20ml容量瓶中，用水稀释成浓度为0.05mg/ml的溶液，作为自身对照溶液；

③新霉胺对照品溶液的制备：精密称取新霉胺对照品适量，用水定量稀释成浓度为0.02mg/ml的溶液，即得；

（3）测定：分别精密量取供试品溶液和自身对照溶液各10ul注入液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；供试品溶液中杂质新霉胺的含量，用新霉胺对照品溶液以外标法计算，新霉素C及其他有关物质的含量，用自身对照溶液以自身对照法计算。

上述的硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，所述的检测器为电喷雾检测器（CAD）。

上述的硫酸新霉素组分及有关物质的HPLC检测方法，用HPLC法检测硫酸新霉素能将新霉素B与新霉素C分离，可单独测定得出这两个组分的含量。

以下为本发明曲咪新乳膏中硫酸新霉素含量的HPLC检测方法的方法学验证情况：

1、专属性试验