[发明专利]一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法及应用

说明书

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法及应用。本发明利用核壳结构的双金属纳米材料Au@Pt功能化氮掺杂的石墨烯负载Cu²⁺作为催化材料，与检测抗体孵化后作为标记物，同时利用聚多巴胺功能化的金纳米粒子作为电极修饰材料，从而实现了肺癌标志物CEA、CA125、SCCA的检测，具备灵敏度高，特异性强，检测限低，对肺癌的早期检测具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，涉及一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法及应用。具体是采用新型纳米功能材料作为催化剂标记检测抗体，实现对肺癌标志物CEA、CA125、SCCA的灵敏检测。

背景技术

肺癌具有较高的发病率，不易察觉，且肿瘤的生长和转移的速度快，成为对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。因此，实现肺癌标志物的灵敏检测，对于肺癌的早期发现和早期治疗非常重要。目前，对于肺癌标志物的检测方法有很多，如酶联免疫法，放射免疫法等，但这些方法在检测过程中可能需要大型仪器设备，存在放射性污染等问题，因此，发明一种特异性强，灵敏度高，检测速度快，操作简便的肺癌肿瘤标志物传感器十分重要。

电化学免疫传感器依靠抗原与其相应抗体的特异性结合，已经广泛应用于肺癌及各种肿瘤标志物的检测，一般可分为夹心型免疫传感器和无标记型免疫传感器两种。夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、检测范围宽、检测下限低、检测快速等优点，已广泛应用于环境监测、食品安全控制、生物监测、临床检验等领域。

核壳结构的双金属纳米复合材料因其独特的光学、电学以及化学性质，目前已在生产、生活及科研中得到了广泛应用。氮掺杂石墨烯具有大的表面积、良好的导电性和生物相容性，被广泛用于电池、传感器等领域。本发明采用聚多巴胺功能化的金纳米粒子作为基底材料，Au@Pt DNs/NG/Cu²⁺作为催化材料，并与检测抗体进行孵化作为标记物，构建了用于肺癌标记物检测的夹心型电化学免疫传感器。

发明内容

本发明提供了一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法及应用，实现了对肺癌标志物的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的Au@Pt DNs/NG/Cu²⁺标记的传感器应用于肺癌标志物的高灵敏、特异性检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

1. 一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法，步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）取6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的聚多巴胺功能化的金纳米粒子分散液滴涂到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肺癌标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1.5 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

（5）滴加6 µL、0.0001 ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肺癌标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

（6）将6 µL、1.5 ~ 3.5 mg/mL检测抗体孵化物Au@Pt DNs/NG/Cu²⁺-Ab₂溶液滴至电极表面，置于4℃冰箱中孵化40 min，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干，制得一种夹心型肺癌标志物电化学传感器。