[发明专利]一种热稳定性埃博拉治疗性抗体的制备及应用

说明书

本发明公开了一种热稳定性埃博拉治疗性抗体的制备及应用。本发明提供了一种埃博拉病毒抗体的制备方法，包括如下步骤：采用重组病毒免疫禽类动物，得到所述抗体；所述重组病毒是采用埃博拉病毒糖蛋白替换水疱性口炎病毒的糖蛋白得到的重组病毒。采用本发明的方法制备的高免抗体可在室温稳定保存一年时间，无需冷链运输和保存，因此更适合非洲基础设施薄弱地区的应用。

技术领域

本发明涉及一种热稳定性埃博拉治疗性抗体的制备及应用。

背景技术

埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)是烈性传染病埃博拉出血热(Ebolahemorrhagic fever，EHF)的病原体。该病毒于1976年首次被发现，1995年在刚果民主共和国爆发后才被人们所认知，2014-15年西非大规模疫情的爆发，让全球开始关注埃博拉病毒。埃博拉病毒感染性极强，传播途径包括体液、接触及气溶胶，可通过野生动物传播给人，并在人与人之间传播蔓延。世界卫生组织已将其列为对人类危害最严重的病毒之一，在生物安全等级上被列为最危险的第4级病毒。2012年有研究证明，将幸存的感染过埃博拉病毒的非人灵长动物血清注入多个动物，可使这些动物抵御致死剂量埃博拉病毒的攻击，提示埃博拉病毒抗血清具有治疗埃博拉感染的潜力。后来有研究人员尝试将多个抗埃博拉病毒糖蛋白(EBOV-GP)的单克隆抗体混合后，用于治疗埃博拉病毒感染病毒，也证明了一定的治疗效果。我国军科院的研究人员采用埃博拉病毒样颗粒(VLP)作为免疫原，免疫马匹制备了高免血清，注入小鼠体内，可使感染埃博拉病毒鼠适应株的小鼠存活。这些研究对于埃博拉的抗体治疗提供了依据和基础。

埃博拉病毒主要流行于非洲，而且主要在雨林或偏远的草原地区。由于偏远地区基础设施滞后、人才不足、资金短缺，缺乏基本的公共卫生保障体系，而且电力供应严重不足，缺乏必要的冷链运输。尽管埃博拉病毒单克隆抗体和马高免血清对于埃博拉病毒感染具有一定的治疗效果，但由于这些抗体需要严格的冷链运输和保存要求，否则极易丢失活性，因此在条件恶劣的非洲应用受到了限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种热稳定性埃博拉治疗性抗体的制备及应用。

本发明提供了一种埃博拉病毒抗体的制备方法，包括如下步骤：采用重组病毒免疫禽类动物，得到所述抗体；所述重组病毒是采用埃博拉病毒糖蛋白替换水疱性口炎病毒的糖蛋白得到的重组病毒。

所述禽类动物具体可为鸡，更具体可为120日龄蛋鸡。

所述重组病毒是采用埃博拉病毒糖蛋白编码基因替换水疱性口炎病毒基因组中的糖蛋白编码基因得到的重组病毒。

所述埃博拉病毒糖蛋白如序列表的序列2所示。

所述埃博拉病毒糖蛋白编码基因如序列表的序列1所示。

所述水疱性口炎病毒基因组序列如GenBank：J02428.1所示。

所述重组病毒的制备方法具体包括如下步骤：将主质粒VSV-EBOVGP、辅助质粒pCAGGS-N、辅助质粒pCAGGS-P、辅助质粒pCAGGS-L和辅助质粒pCAGGS-T7共转染Vero和293T混合细胞，72h后收集细胞上清液，将上清液重新感染Vero细胞并连续传代直到形成明显细胞病变，收获上清病毒液并进行标定，得到重组病毒。

所述主质粒VSV-EBOVGP、辅助质粒pCAGGS-N、辅助质粒pCAGGS-P、辅助质粒pCAGGS-L和辅助质粒pCAGGS-T7的质量比为6.5μg：10μg：10μg：10μg：10μg。