[发明专利]一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基及制备方法

权利要求书

1.一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基，其特征在于：由以下组分制成，α-MEM/HG-DMEM培养基、胎牛血清5～50％体积百分比、谷氨酰胺0.5～10％体积百分比、吲哚美辛100～400μM、胰岛素0.1～20μg/ml浓度、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤10～200μM、地塞米松10～200nM体积、精胺0.1～20μM。

2.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基，其特征在于，由以下组分制成，α-MEM/HG-DMEM培养基、胎牛血清5～20％体积百分比、谷氨酰胺0.5～5％体积百分比、吲哚美辛100～200μM、胰岛素0.1～10μg/ml浓度、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤50～200μM、地塞米松50～200nM体积、精胺0.1～10μM。

3.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基，其特征在于，由以下组分制成，HG-DMEM培养基、胎牛血清10％体积百分比、谷氨酰胺1％体积百分比、吲哚美辛200μM、胰岛素1μg/ml浓度、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤100μM、地塞米松100nM体积、精胺1μM。

4.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，

(1)、培养皿清洁，将培养皿放入超声波清洗机清洗，冲洗干净晾干后将培养皿用塑料网袋包裹放入硫酸-重铬钾清洁液中，取出培养皿后先用自来水冲洗10次，再用单蒸水冲洗三次，最后用双蒸水冲洗1次，晾干，用牛皮纸包裹后放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌处理；

(2)、配备培养基，按配方在培养皿中配制α-MEM/HG-DMEM培养基；

(3)、混合原料，依次箱培养基中加入胎牛血清、谷氨酰胺母液、吲哚美辛母液、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤母液、地塞米松母液和精胺母液，添加过程应持续缓慢进行，并使用干净的玻璃棒不断搅拌；

(4)、过滤混合液，将抽滤瓶灭菌，在超净工作台上将0.22μm滤膜垫在抽滤瓶上，将混合液抽滤后在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。

5.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述人间充质干细胞成脂诱导分化包括以下步骤，

1)、获得人间充质干细胞：利用含10％FBS的低糖DMEM培养基培养扩增人间充质干细胞；

2)、预处理：使用胰酶消化细胞，取细胞按照2×10⁴个/cm²接种6孔板，在生长培养液中长到基本融合，生长培养液的组成为HG-DMEM培养液、10％体积百分比FBS和1％体积百分比谷氨酰胺；

3)、细胞诱导：使用本专利成脂诱导培养液诱导，每隔3天进行培养液更换，诱导时间应为2周；

4)、观察记录：进行成脂相关基因表达检测,并进行油红O染色后用倒置显微镜观察记录。

6.根据权利要求5所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述人间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞或脂肪间充质干细胞。

7.根据权利要求5所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述谷氨酰胺为Thermo Fisher Scientific公司货号为21051024，所述精胺为Sigma-Alorich公司货号为85590。

8.根据权利要求4所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述硫酸-重铬钾清洁液浓度为50％，浸泡时间应为12～24小时。

9.根据权利要求4所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述培养皿在使用硫酸-重铬钾清洁液清洁过程中应佩戴防酸橡皮手套、围裙和眼镜。

10.根据权利要求4所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述培养皿灭菌处理过程中灭菌温度应为121℃，灭菌压强应为101.33kPa，灭菌时间应为20分钟。