[发明专利]一种用于预防HPV感染的核酸疫苗在审
| 申请号： | 201810186917.3 | 申请日： | 2018-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN108424926A | 公开（公告）日： | 2018-08-21 |
| 发明（设计）人： | 庞以芹;谢亦武;吴必杰;魏勇 | 申请（专利权）人： | 江苏润洁生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C07K19/00;A61K39/12;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京元本知识产权代理事务所 11308 | 代理人： | 黎昌莉 |
| 地址： | 223699 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微环 预防 宿主细胞基因组 表达外源基因 生物医药领域 产业化生产 核苷酸序列 病毒载体 工程细菌 核酸疫苗 衣壳蛋白 制备工艺 重要意义 宫颈癌 扩增 整合 质粒 制备 突变 疫苗 诱发 应用 安全 | ||
1.一种HPV-L1重组微环DNA，其特征在于，所述HPV-L1重组微环DNA连接有HPV-L1重组片段，所述HPV-L1重组片段由信号肽序列区和HPV16亚型的L1基因依次连接组成，所述L1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的重组微环DNA，其特征在于，所述信号肽序列区为选自组织型纤溶酶原激活物tPa、HSV gDs及生长激素的分泌信号肽对应的核苷酸序列中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的重组微环DNA，其特征在于，所述信号肽序列区的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
4.根据权利要求1所述的重组微环DNA，其特征在于，所述HPV-L1重组片段还包含标签区，所述标签区与权利要求1所述的L1基因连接并位于其下游。
5.根据权利要求4所述的重组微环DNA，其特征在于，所述标签区的核苷酸序列如SEQID NO:3所示。
6.根据权利要求1所述的重组微环DNA，其特征在于，所述HPV-L1重组片段末端为终止密码子。
7.根据权利要求1所述的重组微环DNA，其特征在于，所述HPV-L1重组片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
8.权利要求7所述的重组微环DNA中的HPV-L1重组片段。
9.融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由权利要求8所述HPV-L1重组片段编码得到。
10.权利要求1所述重组微环DNA的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)设计两端加BglII和SalI酶切位点的权利要求1的HPV-L1重组片段，并合成，得目的基因；
2)用BglII和SalI同时双酶切步骤1)的目的基因和ZY781载体，回收，连接，即得亲本质粒；
3)用上述亲本质粒转化大肠杆菌ZYCY10P3S2T，过夜培养，质粒酶切及测序验证插入正确的片段；
4)将上述菌液接入含kana的TB培养液中，37℃培养后与Minicle Induction Mix按等体积混合，于32℃反应5-8h，反应结束后，离心提质粒，即获得含有权利要求1所述的重组微环DNA；
其中，步骤4)中Minicle Induction Mix的制备方法为：向100ml LB培养基中加入1MNaOH 4ml和20％阿拉伯糖200μl，混合后经0.22μm滤膜过滤。
11.权利要求1所述的重组微环DNA在用于制备预防HPV感染的药物的用途。
12.权利要求8所述的HPV-L1重组片段在用于制备预防HPV感染的药物的用途。
13.权利要求9所述的融合蛋白在用于制备预防HPV感染的药物的用途。
14.一种预防HPV感染的药物，其特征在于，所述药物为权利要求1所述的重组微环DNA以及赋予它的药学的载体。
15.根据权利要求14所述的药物，其特征在于，所述药物为核酸疫苗。
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