[发明专利]一种从毛花猕猴桃根中提取抗肿瘤化合物的方法

说明书

本发明涉及一种从毛花猕猴桃根中提取抗肿瘤活性成分2α,3α,24‑三羟基‑12‑烯‑28‑乌苏酸的方法，该方法包括乙醇回流提取、大孔吸附树脂、反相色谱纯化、重结晶，得到毛花猕猴桃根抗肿瘤活性单体成分2α,3α,24‑三羟基‑12‑烯‑28‑乌苏酸。使用本发明方法获得的抗肿瘤活性成分化合物纯度可达95％以上，反应得率高，制备方法步骤简便，效率高，对环境污染相对较小，制备成本低，适于工业化生产。

技术领域

本发明涉及中药制备领域，具体涉及一种从毛花猕猴桃根中提取化合物的方法。

背景技术

癌症作为一种高致死率的疾病，严重危害人类健康，预测至2020年，全球新发肿瘤病例将达到1500万例，因疾病死亡的人数将达到1200万例。在癌症治疗领域中，天然药物以其作用机制独特、作用靶点多、耐受性好、毒副作用相对较小越来越受到人们的关注。据统计，当今适用于临床的化疗药物中有接近50％属于天然产物或者来自其衍生物。

猕猴桃(Actinidiasinensis)，民间俗称“羊桃”、“阳桃”、“藤梨”等，全世界范围内猕猴桃属植物资源极为丰富，品种达到66种，大部分生长在马来西亚至西伯利亚东部的地区，其中有62种在中国被发现，主要分布在秦岭以南和横断山脉以东区域。毛花猕猴桃(Actinidia eriantha Benth.)是猕猴桃属植物的一种，又名白花山毛桃、毛冬瓜、白藤梨，广泛分布于浙江、福建、江西、湖南、广西及广东省区。据记载，其具有清热利湿，活血消肿，解毒等功效。作为浙江少数民族用药畲药的一种，在畲族中被广泛用于肿瘤治疗。

毛花猕猴桃作为具有肿瘤临床治疗基础的传统民族医药，目前国内外关于其研究与开发利用的相关报道却相对较少。因此，有必要运用新技术、新方法对毛花猕猴桃的抗肿瘤活性物质、提取方法与药效机制进行系统研究，提供疗效确切且毒副作用小的癌症治疗潜在药物。

有文献报道从毛花猕猴桃根中提取分离得到一种五环三萜皂苷单体化合物：2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸，分子结构如下：

体外试验表明，其能显著抑制人肝癌细胞株HepG2、人前列腺癌细胞株pc3、人胃癌细胞株BGC-823、人结直肠癌sw620的增殖，是具有潜力的抗肿瘤天然药物。但是，从毛花猕猴桃根中简单、高效提取分离得到2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸的大规模工业生产工艺方法却尚未见文献报道。目前现有技术仅报道为鉴定目的的从毛花猕猴桃根中提取分离2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸的相关方法，这些方法步骤繁复、效率低，且纯度和得率均不符合工业大规模生产要求。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种从毛花猕猴桃根中高效提取抗肿瘤成分2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸的方法。

本发明通过以下方法实现本发明目的：

(6)取毛花猕猴桃根，粉碎至粒度为40-100目；

(7)毛花猕猴桃根粉末用乙醇回流提取；

(8)滤液经减压至无醇味，加水稀释，离心；

(9)离心的滤液通过大孔吸附树脂柱，依次用水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，减压浓缩，干燥，得总皂苷；

(10)总皂苷通过反相色谱纯化，重结晶，得到2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸。

更优选的，本发明方法步骤(1)中的粒度为60目。

更优选的，本发明方法步骤(2)中的乙醇体积浓度为70％。

更优选的，本发明方法步骤(2)用体积浓度70％乙醇浸泡0.5小时后，分两次提取，第一次用10倍量体积浓度70％乙醇提取1小时，第二次用8倍量的体积浓度70％乙醇提取0.5小时。