[发明专利]半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种人的半乳糖‑1‑磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白及其应用，将大量半乳糖症患者、白血病患者作为研究病例，对病例进行基因检测并分析，确定出人的半乳糖‑1‑磷酸尿苷酰转移酶的突变蛋白，根据该人的半乳糖‑1‑磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为半乳糖症、白血病的基因诊断提供指引作用，实现半乳糖症、白血病的诊断与治疗。

技术领域

本发明涉及一种基因工程领域，尤其涉及一种人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白及其应用。

背景技术

尿苷酰转移酶已糖-1-磷酸尿苷酰转移酶，又称半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶，是乳糖代谢中Leloir途径的一个关键酶。其活性中心的两个组氨酸(his～(164)和his～(166))上的咪唑环为亲核催化基团，催化葡萄糖-1-磷酸(G-1-P)与UDP-半乳糖形成半乳糖-1-磷酸(Gal-1-P)和UDP-葡萄糖，反应中转移的是5-磷酸尿苷基团。

半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶缺乏所致的半乳糖症是最多见的遗传性半乳糖血症，其为常染色体隐性遗传疾病。患者半乳糖代谢终止于1-磷酸半乳糖阶段。杂合子病人此酶仅活性低下，但如果不持续服用半乳糖饮食，酶活性还可以维持健康。而纯合子病人此酶完全缺乏，如食用富含半乳糖的食物，病人会出现严重病变，甚至死亡。如果及时停用含半乳糖的食物，病人除智力障碍外，其他的各种症状均可消失。

且在研究中发现，半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶与白血病的发生也有一定的关系，因此，对人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变的检测，对判断人体是否患有半乳糖症、白血病具有一定的指引作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白及其应用。

本发明技术方案包括：

第一方面，提供一种人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

第二方面，提供一种人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶的突变蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

第三方面，提供一种基因芯片，包括：固相载体和固定在该载体上的核苷酸探针；所述核苷酸探针根据所述人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白的核苷酸序列，与人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶正常蛋白的核苷酸序列的比对结果确定。

优选地，所述核苷酸探针为SEQ ID NO:3所示的碱基序列。

第四方面，提供一种特异性识别人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白的单克隆抗体，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一种用于检测人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白的抗体的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括：包被有上述单克隆抗体的ELISA酶标板、酶标二抗、检测对象的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶蛋白、样品稀释液、包被缓冲液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。

优选地，所述酶标二抗为稀释的HRP辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一种基于上述任一所述ELISA试剂盒检测人的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶突变蛋白的抗体的方法，包括：

a、使用所述包被缓冲液对上述单克隆抗体进行稀释，并将稀释后的所述单克隆抗体加样至ELISA酶标板的孔中，并室温孵育；

b、使用所述样品稀释液将检测对象的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶蛋白稀释成不同浓度梯度，并将不同浓度梯度的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶蛋白分别加样至ELISA酶标板的孔中，室温孵育；

c、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；