[发明专利]人心肌肌钙蛋白I/肌红蛋白/肌酸激酶同工酶三合一测定试剂盒及制法

说明书

本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，具体地说是一种人心肌肌钙蛋白I/肌红蛋白/肌酸激酶同工酶三合一测定试剂盒及制法，设有试纸卡，其特征在于所述试纸卡由下至上依次设有：PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中结合垫上吸附有稀土Eu³⁺荧光微球标记的抗人心肌肌钙蛋白I、抗肌红蛋白、抗肌酸激酶同工酶三种单克隆抗体‑微球偶联复合物，所述稀土荧光微球的直径为150nm，稀土荧光微球含稀土镧系元素Eu³⁺，在基态下稳定，在337nm激发光源作用下发射出波长615nm的荧光：所述单克隆抗体为纯化后混合的单克隆抗体，分别来源于针对2‑6个不同人心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶等抗原表位的单克隆抗体细胞株。具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强等优点。

技术领域

本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，具体地说是一种能够快速准确的同时 对血浆和全血样品中人心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶三个心血管疾病相关指 标进行定量分析的三合一测定试剂盒及制法。

背景技术

人心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Myo)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)是理想的心肌 损伤标记物，具有突出的急症救治意义。肌钙蛋白由肌钙蛋白I、T、C三亚基构成，当心肌损伤后，心急肌钙蛋白复合物释放到血液中，4-8小时后开始在血液中升高，升高的cTnI能在血液中保持很长时间(5-10天)，这样就提供了较长的检测期。cTnI目前已被大量临床数据证明是急性冠脉综合征(ACS)尤其是MI(心梗)诊断、危险分层、病情监测和预后评估 的首选的最重要的指标。肌红蛋白(Myo)是一种氧结合血红素蛋白，主要分布于心肌和骨骼肌组织。在急性心肌损伤时，肌红蛋白最先被释放入血液中，在临床症状出现约2-3小时后，血中肌红蛋白可超出正常上限，9-12小时达到峰值，24-36小时后恢复正常。测定血清肌红蛋白可作为急性心肌梗塞(AMI)诊断早期最灵敏的指标。但其特异性差，在骨骼肌损伤、创伤、肾功能衰竭等疾病时，都可导致其升高。Myo阳性虽不能确诊AMI，但可作为早期排除AMI的重要指表。CK-MB主要存在于心肌中，一般在心肌损伤后3～8小时升高，9～30小时达高峰，48～72小时恢复正常。且其高峰出现时间与预后程度有一定关系，高峰出现早者预后较好。在20世纪90年代CK-MB被认为是诊断AMI的金标准。

CN 105137071 A公开了一种心肌肌钙蛋白I均相酶免疫法测定试剂盒，该检测试剂盒包 括：根据肌钙蛋白I全氨基酸序列合成相应抗体作用位10-30个氨基酸的微型肽段，将合成 肽段共价标记于载体(酶蛋白)并制备反应试剂；同时采用肽段作用的抗体制备成免疫酶试 剂和纯化人心肌肌钙蛋白I(cTnI)制备而成的标准品。该试剂盒可用于半自动或全自动生化 分析仪器准确、特异性的测定血清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量，但只能检测人血清中人心 肌肌钙蛋白I，未能覆盖血浆或全血样本，且也未能同时检测多个指标，且也以全面、准确 判断心肌细胞损伤程度。

CN104407149A公开了一种抗心肌抗体四联诊断试剂盒，该抗心肌抗体四联诊断试剂盒由 四段抗心肌抗体多肽抗心肌线粒体腺苷酸转移酶抗体、β1肾上腺素能受体抗体、抗钙离子 通道抗体和心肌肌球蛋白重链抗体分别包被组成。利用该试剂盒检测疑诊DCM患者血清中抗 心肌肽类抗体，可提高DCM的诊断水平，实现早期诊断，但该检测方法的特异性一般只有百 分之90以下。

现有技术未公开报道能够同时定量能检测人心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工 酶的心肌损伤标记物指标的免疫分析技术，使其具备良好的检测特异性，高灵敏度和准确性， 已达到临床检测的实际意义。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的缺点和不足，提出了一种利用荧光免疫层析的灵敏性，结 合荧光免疫层析分析仪实现的灵敏度高、快捷简便，可以同时准确定量检测人心肌肌钙蛋白 I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶三合一测定试剂盒及制法。

本发明可以通过以下措施达到：