[发明专利]一种豆甾烷-3,6-二酮的制备方法

说明书

本发明公开一种豆甾烷‑3,6‑二酮的制备方法，是先利用玉米黑粉菌发酵产生菌液，然后从菌液中提取和分离得到豆甾烷‑3,6‑二酮，所述发酵的培养基为马铃薯葡萄糖肉汤培养基，所述发酵的转速为120rpm/min，所述发酵的天数为6～8天，所述发酵的接种孢子数为6x10³～6x 10⁵spore/mL，所述发酵的温度为23℃～33℃，所述发酵的起始pH值为5～9。本发明的制备方法通过玉米黑粉菌发酵制备豆甾烷‑3,6‑二酮，制备周期时间控制在8天内，纯度达98.5％，实验室核算成本控制在200元/5mg；与现有制备方法相比，降低了80％的制备成本，提高了1.3％的产品纯度，且可进行大量制备。

技术领域

本发明涉及天然产物制备技术领域，具体涉及的是一种豆甾烷-3,6-二酮的制备方法。

背景技术

豆甾烷-3,6-二酮是一种固醇类化合物，结构见图1所示,分子式:C₂₉H₄₈O₂，分子量428.4，因为结构上没有羟基官能基，故极性偏低，易溶于石油醚、丙酮等疏水性有机溶剂。在生物活性研究上发现其有很多功效：抗骨质疏松实验：抑制破骨细胞分化效率达到49％[Hirokazu,K.Osteoclast-Forming Suppressive Compounds from Makomotake,Zizanialatifolia Infected with Ustilago esculenta.Biotechnology and Biochemistry,2006.70(11):2800-2802.]；抗炎实验：能有效抑制急性发炎小鼠的水肿，从山麻杆碱萃取产物的动物实验中老鼠水肿抑制率达到50.9％[Festus,B.C.Okoye,Patience,O.Osadebe.Anti-inflammatory and membrane-stabilizing stigmastane steroidsfrom Alchornea floribunda leaves.Planta Med,010.76(2):172-177.]；抗肿瘤实验：诱导癌细胞凋亡及抑制癌细胞生长活性；从裸蒴根萃取产物的肝癌细胞实验：1.Hep3B(人肝癌细胞)的IC₅₀＝41.6μg/mL；2.SMMC-7721(大鼠肝癌细胞)的IC₅₀＝75.0μg/mL[Zhang xiaoyu.Chemical Constituents from Roots of Gymnotheca chinensis.Chin J ApplEnviron Biol,2012.18(6):1014-1016.]。

豆甾烷-3,6-二酮来源主要是从天然植物中萃取，也可以先从植物中萃取得到豆固醇再经过半合成的方式获得，但随着合成步骤的增加，最终产率只有8.5％。虽然豆甾烷-3,6-二酮有许多生物活性，但现有豆甾烷-3,6-二酮的获得方式不仅耗费时间及金钱，而且产量很低，导致进一步的动物实验及人体试验，所耗费的成本很高，至今未有学者实施开发研究。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中豆甾烷-3,6-二酮的制备步骤繁琐、成本过高等缺陷，提供一种高效制备豆甾烷-3,6-二酮的方法。

为了达成上述目的，本发明的解决方案是：

一种豆甾烷-3,6-二酮的制备方法，是先利用玉米黑粉菌发酵产生菌液，然后从菌液中提取和分离得到豆甾烷-3,6-二酮，所述发酵的培养基为马铃薯葡萄糖肉汤培养基，所述发酵的转速为120rpm/min，所述发酵的天数为6～8天，所述发酵的接种孢子数为6x10³～6x 10⁵spore/mL，所述发酵的温度为23℃～33℃，所述发酵的起始pH值为5～9。