[发明专利]一种测定极性有机含氮化合物的在线衍生高效液相色谱法

权利要求书

1.一种测定极性有机含氮化合物的在线衍生高效液相色谱法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 样品前处理

取采样过的石英滤膜作为样品，先剪碎，加入30 mL甲醇，在0 ℃下超声萃取45 min，萃取液经0.45 µm PTFE滤膜过滤，氮吹至近干，用甲醇定容至1 mL，得样品溶液；同时，取同批次的空白石英滤膜与样品同步进行样品前处理，得空白样品溶液；

S2. 标准溶液和衍生试剂的配制

S21. 标准溶液的配制

有机胺标准品，其含2.0 mol/L甲胺、2.0 mol/L乙胺、纯度≥99%的丙胺、丁胺、戊胺、己胺和苯乙醇胺，先将所述有机胺标准品配制成浓度为1000 mg/L的混合标准溶液，再用甲醇稀释得到浓度为10 mg/L的有机胺混合标准溶液；

氨基酸标准品：含丙氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、组氨酸、谷氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、络氨酸、缬氨酸和赖氨酸，浓度均为2.5 µmol/mL，先将所述氨基酸标准品用甲醇稀释成浓度为250 µmol/L氨基酸标准储备液，再将250 µmol/L氨基酸标准储备液与浓度为10 mg/L的有机胺标准溶液按1：1体积混合，得到氨基酸和有机胺的混合标准溶液，再用甲醇将混合标准溶液逐级稀释成多个浓度梯度的标准曲线溶液及其构成的标准曲线，其中氨基酸和有机胺的标准曲线范围分别为：0.125-125 μM/L和2.5-5000 μg/L；

S22. 衍生试剂配制

硼酸盐缓冲液：0.1 M Na₂B₄O₇·10 H₂O，pH调至10.2；

OPA衍生试剂：7.5 mM 邻苯二甲醛和225 mM 3-巯基丙酸溶于0.1 M硼酸缓冲液；

进样稀释液：1 M 醋酸溶液；

S3. 在线衍生和分离

S31. 在线衍生

将前述标准曲线溶液、样品溶液及空白样品溶液分别通过高效液相色谱仪上自动进样器的自动混合和控温功能，实现邻苯二甲醛与目标化合物的在线衍生；

其中高效液相色谱仪的仪器条件如下：

进样体积：10 µL；

自动进样器温度：25 ℃

保护柱：ThermoScientific C18，5 µm，4.6 mm*10 mm；

分析柱：ThermoScientific Hypersil Gold，5 µm，4.6 mm*150 mm；

柱温： 35 ℃ ；

流动相：流动相A：50 mM KH₂PO₄溶液，pH4.6；流动相B：ACN：MeOH：H₂O体积比为45：45：10；

流动相梯度：0-3 min， 28% B； 3-22 min， 28-80% B； 22-27 min， 80% B； 27-27.5min， 80-28% B； 27.5-30 min， 28% B；

流速：1.5 mL/min；

检测波长：激发波长：230 nm； 发射波长：450 nm；S32.分离

衍生反应完后衍生物通过自动进样器自动进样至色谱柱进行分离，分离的目标化合物后流入分析柱，由分析柱进行色谱分析后，进入荧光检测器进行定量检测；

S4. 定性和定量分析

S41. 定性分析：当目标化合物在所优化的检测条件下完全分离，且当样品溶液中目标化合物的保留时间和混合标准溶液的保留时间误差在5%之内，则判断样品中含有目标化合物；

S42. 定量分析

当连续九次进样浓度为100 µg/L的混合标准溶液，得到目标化合物的保留时间和峰面积的相对标准偏差均小于5%，各个目标化合物色谱图的标准曲线具有良好的线性，且方法回收率在70-130%范围内且目标化合物不受样品基质影响，则认为该测定方法适用于大气中极性有机含氮化合物的测定，当某一目标化合物在样品中的信噪比≥10，则判定该目标化合物在该样品中有检出。