[发明专利]枯草芽孢杆菌F4启动子的调控序列文库

说明书

本公开涉及一种枯草芽孢杆菌F4启动子的调控序列文库，由SEQ ID NO.1‑3所示的调控序列组成。本公开还提供了由含有所述调控序列文库中的调控序列的启动子所组成的枯草芽孢杆菌F4启动子文库、一种重组表达载体、表达外源蛋白的方法，以及，所述调控序列文库和启动子文库在制备重组表达载体和/或表达质粒中的用途。通过上述技术方案，可以获得有不同的启动外源蛋白转录的强度，从而根据实际生产目的需要对外源蛋白表达的启动强度进行合理选择和控制。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种枯草芽孢杆菌F4启动子的调控序列文库、启动子文库、一种重组表达载体、一种表达外源蛋白的方法和该调控序列文库和启动子文库的用途。

背景技术

枯草芽孢杆菌作为一种革兰氏阳性菌，由于其具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性以及良好的发酵基础和生产技术，是目前原核表达系统中表达和分泌外源蛋白的理想菌株。

在基因工程中，启动子是实现外源基因高效表达的因素之一。因为宿主菌多选用分裂能力强、分泌蛋白多的原核生物，所以利用原核生物启动子调控机制、寻找理想工程启动子对发酵行业尤为重要。

实现外源蛋白的稳定高效表达需要一个适宜强度的启动子。F4启动子是从枯草芽孢杆菌ylbp启动子P16截短而来的，余小霞等(Yu,X.,Xu,J.,Liu,X.,Chu,X.,Wang,P.,Tian,J.,et al.(2015).Identification of a highly efficient stationary phasepromoter in Bacillus subtilis.Scientific Reports,5,18405.)通过截短实验发现其发挥功能仅需103bp长度的片段，并将其命名为F4启动子。该启动子可在菌体生长的稳定期高效启动下游基因的表达。与工业上常用的组成型启动子P43、自诱导型Gsib启动子相比，具有更高的启动子活性，对于研究启动子序列与调控活性的对应关系具有天然的优势，是不可多得的好材料。

但是启动子的应用不能仅追求其表达强度，启动子活性的高低往往不能反映于外源蛋白的表达量。这是二者的特性不能相互兼容所造成的。因此有必要开发构建一个启动子强度梯度的文库，从而针对不同外源蛋白、不同宿主细胞，以及，不同的工业生产需要而设计不同的启动子使用策略。

发明内容

本公开的目的是开发出一种启动子调控序列文库，从而对枯草芽孢杆菌启动子的调控机制加以利用，为枯草芽孢杆菌启动子的产业应用提供更丰富的材料来源。

为了实现上述目的，本公开提供了一种枯草芽孢杆菌F4启动子的调控序列文库，所述启动子调控序列文库由SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的调控序列组成。

本公开还提供了启动子文库，所述启动子文库由分别具有本公开第一个方面所述的调控序列SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的启动子组成。

本发明还提供了一种重组表达载体，该重组表达载体能够允许插入阅读框并使所插入的阅读框在细菌中表达出蛋白质，所述重组表达载体中的启动子选自本公开所述的启动子文库中的启动子。

本发明还提供了一种表达外源蛋白的方法，其中，该方法包括：将编码所述外源蛋白的阅读框插入如上所述的重组表达载体得到重组表达质粒，并将所述重组表达质粒导入感受态细菌中得到表达菌株，然后培养所述表达菌株。

本发明还提供了如上所述的枯草芽孢杆菌F4启动子调控序列文库在制备重组表达载体和/或表达质粒中的用途。

本发明还提供了如上所述的启动子文库在制备重组表达载体和/或表达质粒中的用途。

通过上述技术方案，本公开在不进行诱导的条件下，可以根据生产目的的需要选取具有不同外源蛋白表达强度的调控序列或启动子，对外源蛋白表达的启动强度进行合理选择和控制。