[发明专利]血清淀粉样蛋白A1突变体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种血清淀粉样蛋白A1突变体，该突变体具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列，或者该突变体具有将SEQ ID No:1所示的氨基酸序列经过一个或者几个氨基酸残基的取代、缺失或者添加后仍具有血清淀粉样蛋白A1的活性不变的氨基酸序列，或者在SEQ ID NO:1的氨基末端和/或羧基末端连接有标签的氨基酸序列的蛋白质；其中所述突变体SEQ ID No:1的氨基酸序列相对于原始血清淀粉样蛋白A1的第111位天冬酰胺为缺失。通过定点突变，对SAA1的氨基酸序列第117位天冬酰胺进行了敲除设计，构建了一种SAA1突变体，在保留原有抗原活性的同时大大提高了SAA1的稳定性，为SAA1作为免疫原或者标准品在免疫学测定中奠定基础。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种血清淀粉样蛋白A1突变体及其制备方法和应用。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(Serum Amyloid A,SAA)是机体受到感染和损伤时分泌的一种主要的急性期蛋白，是组织淀粉样蛋白A的前体物质。SAA是一类多基因编码的多形态蛋白的总称，代表一个相对分子质量为12000的家族，由相关但各具独立基因的蛋白(SAA1-SAA4)组成。其中，人血清淀粉样蛋白A1(hSAA1)主要由肝细胞合成，人SAA2与人SAA1有7个氨基酸的差别，它们均为急性期蛋白，在炎症反应中作用相近。

与SAA1类似，C-反应蛋白(CRP)的浓度也是反映感染性疾病早期炎症的敏感指标，细菌感染时二者浓度升高相平行，病毒感染时，SAA1浓度上升，而CRP的血清浓度几乎不升高或者升高不明显。在感染性疾病中，SAA1的绝对上升要高于CRP，因此SAA1测定，尤其对微小急性相反应可提供更好的鉴别。在临床上对SAA1在病人血清中含量的检测具有辅助诊断价值。

作为感染性疾病的初筛，SAA1检测已经在很多医院开展，市场上已经出现不同方法的检测试剂盒，采用的方法为双抗体夹心法测定SAA1浓度。上述方法中必须以SAA1抗原制备梯度浓度的标准品推算样本中SAA1浓度和SAA1作为免疫原制备抗SAA1抗体。而目前市面所售SAA1蛋白常规条件下存在不稳定、易降解等问题，极大地影响检测结果的稳定性，因此，获得一种高稳定的SAA1具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种SAA1突变体，所述SAA1突变体通过对原始SAA1基因进行定点突变获得，与已报道的SAA1蛋白存在一个碱基位点的不同，从而导致该SAA1突变体在保持原有抗原活性的同时，增强了稳定性，从而解决了现有SAA1不稳定易降解的缺陷。

本发明提供了一种血清淀粉样蛋白A1突变体，该突变体具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列，或者该突变体具有将SEQ ID No:1所示的氨基酸序列经过一个或者几个氨基酸残基的取代、缺失或者添加后仍具有血清淀粉样蛋白A1的活性不变的氨基酸序列，或者在SEQ ID NO:1的氨基末端和/或羧基末端连接有标签的氨基酸序列的蛋白质；其中所述突变体SEQ ID No:1的氨基酸序列相对于原始血清淀粉样蛋白A1的第117位天冬酰胺为缺失。

优选地，该突变体具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列。

本发明还提供了一种编码血清淀粉样蛋白A1突变体的基因，所述基因具有SEQ IDNo:2所示的核苷酸序列，或者所述基因具有编码SEQ ID No:1所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

优选地，该基因具有SEQ ID No:2所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种重组载体，所述重组载体含有所述的基因。

本发明还提供了一种重组菌株，所述重组菌株上述的重组载体。

本发明还提供了一种血清淀粉样蛋白A1突变体的制备方法，包括以下步骤：