[发明专利]一种花生四烯酸的制备方法

权利要求书

1.一种花生四烯酸的制备方法，其特征在于，包括以可产花生四烯酸的高山被孢霉为生产菌株，在发酵过程中流加硝酸铵，分段控制发酵溶氨的步骤，所述分段控制溶氨具体包括下述步骤：流加硝酸铵的时间为发酵1h后，在发酵1-50h时控制溶氨8000-10000ppm；在发酵51h-136h时控制溶氨5000-6000ppm；在发酵137h-250h时控制溶氨200-300ppm；所述发酵所用的发酵培养基包括：葡萄糖160-190 g/L，酵母抽提粉5.0-8.0g/L，KH₂PO₄ 3.0-4.5 g/L，MgSO₄•7H2O 1.0-3.0 g/L，柠檬酸0.50-2.0g/L，NH₄NO₃ 3.0-4.0 g/L，CaCO₃ 4.0-6.0 g/L；所述的高山被孢霉为Mortierella alpina CICC2560。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流加硝酸铵的浓度为0.50-10.0g/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵的温度为23-28℃，所述发酵的时间为240-250h。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵的温度为25℃。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵的时间为246h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基的pH为6.0。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括下述步骤：

(1)原始菌株的活化：将高山被孢霉菌经PDA平板培养冷冻后获得高山被孢霉的冷冻孢子悬液；

(2)种子培养：将高山被孢霉的冷冻孢子悬液接种于摇瓶培养基中通气培养获得种子培养液；

(3)种子扩大培养：将步骤（2）的种子培养液扩大培养或根据最终发酵罐的大小，将步骤（2）的种子培养液逐级扩大培养，获得种子扩大培养液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）种子培养中，转速为180-250rpm，周期为48h-72h，培养温度23-28℃。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)种子扩大培养中，接种量为5%-10%体积比，培养时间为24h-48h，转速为180-250rpm，培养温度23-28℃。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)种子培养的种子培养基包括：葡萄糖 50.0-66.0g/L，酵母抽提物 10.0-20.0g/L，KH₂PO₄ 1.0-3.0g/L，MgSO₄•7H₂O0.5-2.0g/L，培养基的pH为6.0。

11.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)种子扩大培养的种子培养基为：葡萄糖 50.0-66.0g/L，热榨黄豆饼粉 10.0- 20.0g/L，酵母抽提物 10.0-20g/L，柠檬酸0.5-1.0g/L，KH₂PO₄ 2.0-3.0g/L，MgSO₄•7H₂O 1.5-2.5g/L，CaCO₃ 2.0-3.0g/L，培养基的pH为6.0。