[发明专利]单克隆抗体1DB4在检测IrrE转基因农作物中的应用

说明书

本发明提供了一种单克隆抗体，该抗体由保藏编号为CGMCC NO.12268的杂交瘤细胞分泌得到，同时提供了该抗体在检测转IrrE的转基因农作物中的用途以及一种检测转IrrE的转基因农作物的方法。本发明的单克隆抗体能够用于抗旱耐盐胁迫调控蛋白IrrE的WESTERN BLOT检测，可检测到重组IrrE蛋白及转IrrE作物种子；对7种不同来源的各种非IrrE转基因作物也不呈现交叉反应。

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，具体地，涉及一种杂交瘤细胞株、一种单克隆抗体及其在检测转IrrE的转基因农作物中的用途和检测转IrrE的转基因农作物的方法。

背景技术

耐辐射异常球菌(Deinococcus radiodurans)被公认为是迄今发现的具有最强电离辐射抗性的细菌菌株。这种非孢子形成的细菌对其损伤基因组的激活修复，使其能够在极端剂量电离辐射中得以生存，并且不会受到致命损伤以及基因突变。耐辐射异常球菌拥有的修复机制使其对电离辐射的抗性比大肠杆菌高200倍以上。耐辐射异常球菌并不是仅被动的保护细胞抵抗电离辐射，同时还具有异乎寻常的准确DNA损伤修复能力。耐辐射异常球菌对多种形式的氧化胁迫具有很高的抗性。耐辐射异常球菌对于长期的干旱胁迫具有极高的抗性。相对湿度小于5％干旱环境处理6周并不能对耐辐射异常球菌的生存能力产生影响，耐辐射异常球菌R1经过这样的干旱处理细胞生存力仅丧失15％。甚至有相关报道指出将耐辐射异常球菌进行干旱处理6年，菌体仍保留10％的生存力。这一存活效率对于不形成孢子的细菌来说非比寻常。

irrE基因位于耐辐射异常球菌基因组1号染色体上，ORF编号为DR0167。基因全长987-bp，编码一个由328个氨基酸组成的35kDa蛋白。在已有的数据库中并未发现IrrE蛋白的类似蛋白，鉴定其是异常球菌属特异蛋白。近年来研究发现，耐辐射异常球菌中irrE基因是一个特有的、极其重要的DNA修复保护途径的开关基因，对DNA损伤修复起重要的作用。研究认为irrE基因是一种新型的负责极端辐射抗性的启动基因，在各种DNA损伤修复和保护辐射胁迫反应的途径中起中心调控作用。同时，将该基因在大肠杆菌中表达能显著提高其辐射抗性以及清除氧自由基的能力，而且irrE基因在大肠杆菌中表达显著提高了菌株的高渗、高盐、干旱等抗性。转入irrE基因的大肠杆菌和油菜具有极高的耐盐能力，因此该基因在培育抗旱耐盐新品种作物上具有广泛的应用前景

随着社会的进步，越来越多的基于转基因优良特性的转基因作物商业化种植被国家批准，由此可能带来的食品和环境安全问题引起了人们的高度重视。对转基因作物或转基因食品的检测和鉴定不仅是相关法规的必然要求，也是满足公众知情权的必要技术。因此，建立有效、敏感、快速、准确的检测方法，既是转基因安全性评价的重要研究内容，也是进一步加强我国在转基因作物和产品监管方面的重要技术保障。

在转基因植物的研制开发或在对转基因产品进行筛选或安全性评价时，往往需要对转入的外源性基因进行定性或半定量测定。而单克隆抗体的使用是实施免疫学检测技术的必要条件，高敏感性和特异性的单克隆抗体则是进一步优化反应的重要保证。

发明内容

本发明的目的是提供一种较高的敏感度和特异性的抗IrrE蛋白的单克隆抗体。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC NO.12268。

再一方面，本发明还提供了一种单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNO.12268的杂交瘤细胞株产生。

再一方面，本发明还提供了如上所述的单克隆抗体在检测转IrrE的转基因农作物中的用途。

另一方面，本发明还提供了一种检测转IrrE的转基因农作物的方法，其中，该方法包括如下步骤：S1、从待检测的农作物中提取全蛋白；S2、对所述全蛋白使用如上所述的单克隆抗体进行免疫杂交；S3、如果免疫杂交结果中出现IrrE的阳性条带，则指示待检测的农作物为转IrrE的转基因农作物。